龜鹿二仙膠對成骨細胞Ⅰ型膠原基因表達的實驗研究.pdf

1、背景:
　　研究表明Ⅰ型膠原與骨質(zhì)疏松癥(Osteoporosis，OP)有著密切聯(lián)系。Ⅰ型膠原由Col1a1及Col1a2基因編碼，可受轉(zhuǎn)化生長因子β(transforminggrowthfactor-β，TGF-β)調(diào)控。TGF-β1、TGF-β2是TGF-βs的兩個異構(gòu)體。中藥龜鹿二仙膠可以治療骨質(zhì)疏松癥，以往研究多以臨床療效觀察為主，與Ⅰ型膠原有關(guān)的研究較少。
　　目的:
　　研究龜鹿二仙膠對成骨細胞Ⅰ型膠原基

2、因表達的影響，探索龜鹿二仙膠治療OP的機制。
　　方法:
　　取SD大鼠100只，隨機分為空白組、龜鹿二仙膠組（低劑量）、龜鹿二仙膠組（中劑量）、龜鹿二仙膠組（高劑量）、骨化三醇組。每天灌胃1次，持續(xù)7d，末次給藥2h后腹主動脈采血制成含藥血清條件培養(yǎng)基培養(yǎng)成骨細胞。通過MTT法及活細胞形態(tài)觀察來了解含藥血清對成骨細胞增殖及凋亡的影響。應(yīng)用Western Blot法檢測各組成骨細胞Ⅰ型膠原及TGF-β蛋白表達水平。運用PCR

3、(RT-PCR)技術(shù)檢測各組成骨細胞Ⅰ型膠原及TGF-β的mRNA表達。
　　結(jié)果:
　　(1) MTT結(jié)果顯示:龜鹿二仙膠各組的成骨細胞無明顯增殖。骨化三醇組的成骨細胞有明顯增殖(P＜0.05)。細胞活細胞染色提示:骨化三醇組及龜鹿二仙膠各組的成骨細胞無顯著的凋亡。
　　(2) RT-PCR法結(jié)果顯示:骨化三醇組與龜鹿二仙膠各組Col1a1及Col1a2mRNA的水平均有增加(P＜0.01);龜鹿二仙膠中、高劑量組C

4、ol1a1及Col1 a2mRNA水平增加較明顯(P＜0.05)，龜鹿二仙膠高劑量組較中劑量組Col1a1及Col1 a2mRNA水平增加不明顯(P＞0.05);骨化三醇組TGF-β1及TGF-β2 mRNA水平無明顯變化(p＞0.05);龜鹿二仙膠各組TGF-β1及TGF-β2 mRNA水平均有增加(P＜0.01);且龜鹿二仙膠中、高劑量組TGF-β1、TGF-β2 mRNA水平增加一致，比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

5、　　(3) Western blot結(jié)果提示:第24小時，龜鹿二仙膠高劑量組能使成骨細胞Col1a1及Col1a2蛋白合成增加(P＜0.05)。第48小時，骨化三醇組、龜鹿二仙膠各組均能使成骨細Col1a1及Col1a2蛋白合成增加(P＜0.01);龜鹿二仙膠高、中劑量組之間比較差異沒有統(tǒng)計學意義(P＞0.05);第24、48小時，骨化三醇組TGF-β1及TGF-β2蛋白合成無明顯變化(P＞0.05);在24小時，龜鹿二仙膠高劑量組TG