S100A8-A9 在急性動(dòng)脈硬化性腦梗死患者血清中表達(dá)的研究.pdf

1、1.研究的背景和目的：
　　隨著人口老齡化、經(jīng)濟(jì)水平的快速增長及生活方式的改變，心血管疾病、腦血管疾病和惡性腫瘤已構(gòu)成了當(dāng)今人類的三大主要死亡原因。近年來相關(guān)研究表明，腦血管疾病在我國已經(jīng)超越了心血管疾病，躍居人口死亡的第一位，并且每年仍不斷的持續(xù)增長。急性腦梗死是神經(jīng)系統(tǒng)疾病中常見的急性腦血管疾病，是世界范圍內(nèi)致死率和致殘率排名第三的疾病，是一類嚴(yán)重威脅老年人生命健康的重大疾病，并且發(fā)病率呈逐年明顯上升態(tài)勢。隨著急性缺血性腦卒中

2、病因?qū)W研究的發(fā)展，目前將缺血性卒中病因?qū)W分成以下五型：大動(dòng)脈粥樣硬化型（LAA）、心源性卒中型（CS）、穿支動(dòng)脈疾病型（PAD）、其他病因型（OE）及病因不確定型（UE）。其中最常見的類型為動(dòng)脈粥樣硬化性腦梗死(Atherosclerotic cerebral infarction，ACI)，即LAA型。該病主要是由頸部動(dòng)脈或顱內(nèi)大動(dòng)脈狹窄導(dǎo)致急性供血不足，引起腦組織缺血性壞死導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)功能缺損。急慢性炎癥反應(yīng)是ACI血管病變的病理基

3、礎(chǔ)。ACI的發(fā)生是一個(gè)多因素、多層次綜合作用的過程。除了腦梗死的其他危險(xiǎn)因素外，醫(yī)學(xué)界逐步認(rèn)識(shí)到炎性反應(yīng)或者慢性感染性疾病也是動(dòng)脈粥樣硬化性腦梗死發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。腦部缺血產(chǎn)生后，炎癥信號受體介導(dǎo)的信號通路，在引發(fā)炎癥級聯(lián)反應(yīng)過程中起到重要作用。
　　S100A8/A9是鈣結(jié)合蛋白S100家族成員之一，具有豐富的生物學(xué)功能。與炎癥高度相關(guān)，是許多急性和慢性炎癥的重要調(diào)控因子。其形成穩(wěn)定的異形二聚體復(fù)合物并通過其C-末端α-螺旋在

4、空間上延伸，以非共價(jià)鍵形式結(jié)合形成四聚體。S100A8/A9又稱為MRP8/14，主要來源于有活性的中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞及血管平滑肌細(xì)胞。從功能上看，亞基界面有兩個(gè)親和力的Zn2+結(jié)合位點(diǎn)，使它具有促炎癥反應(yīng)的重要功能。S100A8/A9具有廣泛的細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外生物學(xué)功能，能被特異性地分泌至炎癥病灶處，是中性粒細(xì)胞化學(xué)趨化性和黏附性強(qiáng)有力的誘導(dǎo)劑，與炎癥高度相關(guān)，在各種急慢性炎性病變中起主要作用，如急性冠脈綜合征、

5、心功能不全、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸病、肺部疾病都發(fā)現(xiàn)S100A8/A9二聚體濃度升高。但目前S100A8/A9在動(dòng)脈粥樣硬化性腦梗死疾病中的表達(dá)與臨床研究，少見報(bào)道。
　　本課題的目的是研究急性動(dòng)脈粥樣硬化性腦梗死（AACI）發(fā)生時(shí)，了解其分子機(jī)制的相關(guān)功能及調(diào)控關(guān)系，根據(jù)臨床血清中 S100A8/A9表達(dá)情況，探討其相關(guān)性，以作為ACI診斷的參考指標(biāo)之一，并可能發(fā)現(xiàn)ACI新的治療方法的靶點(diǎn)。
　　2.研究內(nèi)容和方法：

6、>　　研究對象：選擇2015年9月至2017年2月廣州市第十二人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科病區(qū)首發(fā)ACI患者103例。選擇在我院體檢中心體檢的健康人群60例作為隨機(jī)對照。所有入選人群簽署知情同意書。病例組入選標(biāo)準(zhǔn)：所有病例均急性起病,有明確的局灶性神經(jīng)系統(tǒng)損害癥狀和體征,經(jīng)頭顱CT和(或)MRI確診，已排除腦出血、心源性腦栓塞或其他原因引起的腦梗死，均符合全國第四屆腦血管病學(xué)術(shù)會(huì)議修訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)。兩組均排除以下情況（可能會(huì)影響相關(guān)指標(biāo)表達(dá)的因素）:

7、
　?。?）其他可能影響相關(guān)指標(biāo)的因素，如心肌梗死、肝、腎功能不全等。
　?。?）近2周未用以下藥物:降脂藥物(他汀類)、脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2抑制劑、抗炎藥物、免疫抑制劑等。
　　（3）近1個(gè)月內(nèi)有感染病史。
　?。?）頭部有外傷且未痊愈或近期內(nèi)有頭部手術(shù)記錄。將所有病例組按照中國腦卒中臨床神經(jīng)功能缺損程度量表（Chinese stroke degree of clinical neural function d

8、efect scale）進(jìn)行神經(jīng)功能調(diào)查，根據(jù)患者的意識(shí)水平和神經(jīng)功能缺損程度分為輕型(0～15分)，中型(16～30分)，重型(31～45分)，分值越高神經(jīng)功能缺損越嚴(yán)重，滿分45分；評分人員是必須進(jìn)行過專業(yè)訓(xùn)練及豐富臨床經(jīng)驗(yàn)的醫(yī)師。
　　研究方案：
　　對照組人群于清晨空腹采取2管5ml肘正中靜脈血，AACI患者于入院急查2管5ml肘正中靜脈血，分別將兩組其中一管血液置于普通真空采血管中，4℃下靜置30 min后，離心機(jī)

9、4000r/min離心15min，分離血清并置于EP管中，-80℃冰箱保存，待標(biāo)本收集完畢后再采用酶聯(lián)免疫吸附法測 S100A8/A9濃度。兩組另外一管血液置于含EDTA的抗凝管中，常溫放置半小時(shí)，然后立即離心，于4℃，3000r／min，離心20min，留取血清置于凍存管中，存放于-80℃冰箱中保存，待標(biāo)本收集完畢后再采用免疫比濁法進(jìn)行統(tǒng)一檢測hs-CRP濃度。所有數(shù)據(jù)均采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。
　　3.研究結(jié)果：

10、r>　　病例組共103例，其中輕型病例組35例：S100A8/A9（2.62±1.22）ug/ml，hs-CRP（23.95±3.56）mg/l；中型病例組46例：S100A8/A9（4.90±4.65）ug/ml，hs-CRP（25.23±2.34）mg/l；重型病例組22例：S100A8/A9（5.85±3.76）ug/ml，hs-CRP（26.33±9.87）mg/l，均高于對照組（60例）：S100A8/A9（1.07±0.53

11、）ug/ml，hs-CRP（3.29±1.09）mg/l，它們之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。三組亞組之間進(jìn)行兩兩組間比較：與輕型病例組比較，均P＜0.05，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與中型病例組比較，P＜0.05，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　直線相關(guān)性分析：將病例組（急性動(dòng)脈粥樣硬化性腦梗死組，AACI）按照中國腦卒中臨床神經(jīng)功能缺損程度量表評分分成的輕、中、重三個(gè)亞組的血清S100A8/A9、hs-CRP水平進(jìn)行Spearman相關(guān)