2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、背景:博爾納病病毒(Borna disease virus,BDV)是引起博爾納病的病原體,最先被發(fā)現(xiàn)于德國博爾納鎮(zhèn)的軍馬中,引起急性腦脊髓非化膿性炎癥的地方性流行病。BDV是一種單股負鏈、非節(jié)段性、非細胞溶性的非逆轉(zhuǎn)錄病毒,具有強烈的噬神經(jīng)性。BDV能感染大部分溫血動物,包括哺乳動物和鳥類等。雖然有關(guān)BDV在人類的自然感染和致病還缺乏直接證據(jù),也未有爆發(fā)流行,但是有文獻對精神病人的流行病學調(diào)查顯示BDV有較高的陽性率,而且體外實驗已經(jīng)

2、證明BDV確能感染人神經(jīng)細胞,并對其增殖凋亡、代謝、蛋白組學和信號通路等產(chǎn)生明顯影響。但是BDV對于人神經(jīng)系統(tǒng)的miRNA研究較為少見,其中人源病毒株Hu-H1對于人神經(jīng)系統(tǒng)及神經(jīng)膠質(zhì)細胞的研究也鮮有報道。利用miRNA芯片技術(shù)和RT-qPCR實驗對miRNA進行高通量篩選鑒定,結(jié)合生物信息學分析,提出miRNA與BDV感染新的假說和課題方向,增強對BDV感染的認識。
  目的:本實驗從miRNA的基本點出發(fā),旨在探討人源BDV病

3、毒株Hu-H1干擾OL細胞miRNA的差異表達和生物學功能,為進一步BDV致病病理機制提供新支點。
  方法:⑴復蘇本實驗保存的BDV長期感染的OL細胞,提取病毒液測定其滴度;擴增本實驗保存的pEGFP-N1-P40和pEGFP-N1-P24質(zhì)粒,用于后續(xù)細胞感染。⑵復蘇本實驗保存的無感染正常OL細胞,感染BDV-Hu-H1病毒,與對照組OL細胞同時培養(yǎng)14天后,測定其感染率并提取RNA;擴增和轉(zhuǎn)染本實驗保存的pEGFP-N1-P

4、40和pEGFP-N1-P24質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染正常的OL細胞后提取RNA。實驗分為OL組、OL/BDV組、OL/P40組、OL/P24組和OL/CON組。⑶提取上述各組細胞RNA進行miRNA芯片篩選實驗,將OL和OL/BDV組的差異miRNAs進行生物信息學分析。⑷將芯片篩選的差異miRNA進行實時熒光定量PCR(RT-qPCR)實驗驗證,從而確定具體差異。
  結(jié)果:①病毒感染OL細胞14天后達到完全感染;質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)染OL細胞并且P

5、24和P40蛋白正常表達。②miRNA芯片在正常的OL細胞和OL/BDV細胞中篩選出10個差異miRNA,其中4個上調(diào)(miRNA-1290, miRNA-1908, miRNA-424-5p, miRNA-146a-5p),6個下調(diào)( miRNA-296-3p, miRNA-1244, miRNA-3676-3p, miRNA-4521, miRNA-4433-3p, miRNA-7-5p)。③將上述差異miRNA進行生物信息學(Pa

6、thway和GO)分析和差異miRNA靶基因的預測,分析對BDV對OL細胞相關(guān)信號通路和生物學功能的干擾和影響。④RT-qPCR實驗將上述差異miRNA進一步驗證,miRNA-1290,miRNA-1908,miRNA-424-5p,miRNA-146a-5p, miRNA-296-3p, miRNA-3676-3p,miRNA-7-5p等7個顯著下調(diào)(P<0.05)。miRNA-1244和miRNA-4521沒有顯著性差異(P>0.0

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