外源性硫化氫對β-淀粉樣蛋白誘導的細胞自噬的影響.pdf

1、目的：本實驗以Aβ25-35肽誘導Neuro-2a細胞損傷，建立體外阿爾茨海默?。ˋD）的細胞模型。通過外源性給予H2S供體（NaHS），觀察不同濃度H2S對毒性Aβ25-35肽誘導的Neuro-2a細胞自噬性死亡的影響及其可能相關的機制，旨在為H2S對AD的治療提供更多的依據(jù)。
　　方法：將Neuro-2a細胞隨機分為空白對照組、Aβ25-35處理組、Aβ25-35+ NaHS組、Aβ25-35+3-甲基腺嘌呤（3-MA）組、N

2、aHS組及Aβ25-35+NaHS+NVP-BEZ235組，Aβ25-35+NaHS組和Aβ25-35+3-MA組細胞分別用NaHS和3-MA預處理2 h后均加用Aβ25-35繼續(xù)處理24h， Aβ25-35+NaHS+NVP-BEZ235組除加入NaHS預處理外需在Aβ25-35處理前0.5 h加入NVP-BEZ235。采用MTT法觀察各組細胞存活率，蛋白質(zhì)印跡法檢測自噬蛋白Beclin-1、微管相關蛋白（LC3）及P62的表達，免疫

3、熒光法檢測LC3的表達及分布，透射電鏡法觀察自噬體的形成。
　　結果：(1)與空白對照組相比，Aβ25-35作用細胞后，細胞存活率降低（P＜0.05），Beclin-1及LC3-Ⅱ表達增加，P62表達降低（P＜0.05），熒光顯微鏡及電鏡下可見細胞自噬體明顯增多。(2)與Aβ25-35組相比， Aβ25-35+3-MA組和 Aβ25-35+NaHS組細胞存活率均增高（ P＜0.05）， Beclin-1及LC3-Ⅱ表達降低，P62

4、增高（P＜0.05），自噬體減少。（3） Aβ25-35+NaHS組p-Akt和p-mTOR的表達高于Aβ25-35組（P＜0.05），而加入特異性 PI3K/Akt通路抑制劑 NVP-BEZ235后， Aβ25-35+NaHS+NVP-BEZ235組細胞p-Akt和p-mTOR表達與Aβ25-35+NaHS組相比降低（P＜0.05）。
　　結論：外源性 H2S能對抗 Aβ25-35的細胞毒性，可能與活化PI3K/Akt/mTOR