外源性硫化氫對(duì)百草枯中毒大鼠肺組織細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制.pdf

1、目的：
　　建立百草枯中毒致大鼠急性呼吸窘迫綜合征模型，觀察肺組織細(xì)胞凋亡變化及凋亡蛋白的表達(dá)，探討不同劑量硫化氫干預(yù)對(duì)肺組織細(xì)胞凋亡的影響及其作用機(jī)制。
　　方法：
　　60只SD大鼠根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表完全隨機(jī)分組，分為生理鹽水對(duì)照組（C組）、NaHS組（N組）、PQ組、PQ+NaHS低劑量組（L組）、PQ+NaHS中劑量組（M組）、PQ+NaHS高劑量組（H組）6組，每組10只大鼠。PQ組和L、M、H組予PQ80mg/

2、kg一次性灌胃建立PQ中毒ARDS模型，C組和N組予一次性灌胃等體積生理鹽水。L、M、H組于染毒3h時(shí)分別腹腔注射NaHS14umol/kg、28umol/kg、56umol/kg，C組和PQ組腹腔注射等體積生理鹽水，NaHS組腹腔注射高劑量NaHS56umol/kg。染毒24h時(shí)處死全部大鼠。抽取腹主動(dòng)脈血液，進(jìn)行動(dòng)脈血?dú)夥治觯环Q取雙肺質(zhì)量測(cè)定肺系數(shù)（LW/BW）、肺濕/干重比（W/D）；光鏡下觀察肺組織的形態(tài)學(xué)改變，通過計(jì)算肺泡損傷

3、數(shù)比值評(píng)估肺損傷程度（IQA）；免疫組化染色法檢測(cè)肺組織Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9蛋白表達(dá)，計(jì)算Bcl-2/Bax比值；末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT)介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記法（TUNEL法）檢測(cè)肺組織細(xì)胞凋亡指數(shù)（apoptotic index，AI）。計(jì)量資料數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s)表示,多組間比較采用單因素方差分析（one-way classification ANOVA）檢驗(yàn)，若差異有統(tǒng)計(jì)

4、學(xué)意義則進(jìn)一步兩兩比較，采用LSD-t檢驗(yàn)。結(jié)果P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.大鼠一般情況及存活情況
　　實(shí)驗(yàn)大鼠無一例死亡。C組和N組大鼠精神、睡眠、攝食、飲水和行為等一般情況正常；PQ組大鼠灌胃后精神萎靡、嗜睡，攝食和飲水量減少，頭顫、行走不穩(wěn)，呼吸急促，口唇、四足發(fā)紺，部分大鼠出現(xiàn)眼球充血、鼻出血； L、M、H組腹腔注射NaHS后上述中毒癥狀均有不同程度改善，H組改善最為明顯。
　　

5、2.肺組織形態(tài)學(xué)改變
　　C組、N組大鼠肺臟正常，肺組織結(jié)構(gòu)完整；PQ組大鼠肺臟體積增大，肺泡腔及肺間質(zhì)明顯出血、水腫，肺泡壁廣泛破壞，肺泡間隔不同程度增厚，部分肺泡萎陷、不張，部分肺泡代償性肺氣腫；L、M、H組上述形態(tài)學(xué)改變不同程度改善，其中H組改善最為顯著。與C組比較，N組IQA差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），PQ組IQA明顯升高（P<0.01）；與PQ組比較，L、M、H組IQA明顯降低（P<0.01），但仍高于C組（P<0

6、.01）。
　　3.LW/BW、W/D的變化
　　與C組比較，N組LW/BW、W/D差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），PQ組LW/BW、W/D明顯升高（P<0.01）；與PQ組比較，L、M、H組LW/BW、W/D降低（P<0.05或 P<0.01），但仍高于C組（P<0.01）。
　　4.動(dòng)脈血?dú)夥治鲎兓?br>　　與C組比較，N組PaO2和PaO2/FiO2差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），PQ組PaO2和PaO2/

7、FiO2明顯下降（P<0.01）。與PQ組比較，M、H組PaO2和PaO2/FiO2升高（P<0.01），但仍低于C組（P<0.01）。
　　5.肺組織凋亡蛋白的變化
　　C組、N組肺組織有少量Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9蛋白表達(dá)，主要定位于肺泡、支氣管上皮細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞；與C組比較，PQ組肺組織Bcl-2蛋白表達(dá)增強(qiáng)（P<0.01），Bax蛋白表達(dá)增強(qiáng)更為明顯（P<0.01），Bcl-2/

8、Bax比值明顯降低（P<0.01），Caspase-3和Caspase-9蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)（P<0.01）。與PQ組比較，L、M組Bcl-2蛋白表達(dá)稍有增強(qiáng)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），H組Bcl-2蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)（P<0.01），M、H組Bax蛋白表達(dá)減弱（P<0.01）， L、M、H組Bcl-2/Bax比值升高（P<0.01）。M、H組Caspase-3和Caspase-9蛋白表達(dá)減弱（P<0.01）。
　　6.肺組

9、織細(xì)胞凋亡的變化
　　C組和N組可見少量凋亡細(xì)胞，主要定位于肺泡、支氣管上皮細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞；與C組比較，PQ組肺組織AI明顯升高（P<0.01）。與PQ組比較，L、M、H組肺組織AI降低（P<0.05或P<0.01），但仍高于C組（P<0.01）。
　　結(jié)論：
　　1、PQ中毒誘導(dǎo)大鼠ARDS時(shí)肺組織細(xì)胞凋亡升高。
　　2、PQ中毒大鼠肺組織 Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)增加，Bcl-2/Bax比值降低， Ca