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文檔簡介
1、目的:視神經(jīng)脊髓炎(NMO)是一類中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)自身免疫性炎性脫髓鞘疾病,主要累及脊髓及視神經(jīng)。水通道蛋白4自身抗體(AQP4-IgG)所介導(dǎo)的補(bǔ)體依賴細(xì)胞毒性作用(CDC)被認(rèn)為在NMO致病機(jī)制中占據(jù)重要的地位,但發(fā)病機(jī)制的研究依然任重道遠(yuǎn):谷氨酸興奮毒性作用是否可參與NMO的發(fā)病目前尚有爭議;作為CNS的主要載脂蛋白載脂蛋白E(ApoE)缺失是否加劇NMO神經(jīng)缺損尚不清楚。本研究通過檢測:(1) NMO體外模型N-甲基-D-
2、天冬氨酸受體(NMDAR,NR)表達(dá)量及培養(yǎng)液谷氨酸濃度(2) ApoE缺失的NMO體外模型(NMDAR,NR)表達(dá)量及培養(yǎng)液谷氨酸濃度。從而探討谷氨酸及其受體NMDAR、ApoE在NMO發(fā)病中的作用。
方法:①提純AQP4-IgG表達(dá)陽性患者血漿中的IgG(NMO-IgG),冷凍干燥后備用;②取7-14d大小的C57BL/6背景野生型(WT)小鼠及載脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠,斷頭取脊髓(脊髓切成300μm薄片)
3、體外培養(yǎng);取8-10W大小的C57BL/6背景wT型小鼠及ApoE-/-小鼠,斷頭分離視神經(jīng)體外培養(yǎng);③用提純的IgG及補(bǔ)體干預(yù)脊髓及視神經(jīng)片制成NMO組同時(shí)設(shè)無干預(yù)的對照組;④免疫組織熒光檢測脊髓、視神經(jīng)中AQP4、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)、NMDAR的NR1及NR2B亞單位表達(dá)情況;比色法檢測培養(yǎng)液中谷氨酸濃度;免疫蛋白印跡法(WB)檢測脊髓、視神經(jīng)的NR1、NR2B蛋白表達(dá)。
結(jié)果:①NMO-IgG及補(bǔ)體干預(yù)小鼠脊髓
4、及視神經(jīng)能夠誘導(dǎo)GFAP、AQP4表達(dá)相較于對照組明顯減少(P<0.05);②NMO-IgG及補(bǔ)體干預(yù)脊髓和視神經(jīng)能夠?qū)е翹MDAR1、NMDAR2B免疫組織熒光平均積分光密度值明顯增多(P<0.05),WT型和ApoE-/-型NMO體外模型組小鼠脊髓和視神經(jīng)的NMDAR1免疫組織熒光平均積分光密度值之間差異不顯著(P>0.05),但ApoE-/-型NMO體外模型組NMDAR2B免疫組織熒光平均積分光密度值要顯著高于WT型NMO體外模型
5、組(P<0.05);③WB半定量檢測NMDAR1、NMDAR2B蛋白水平發(fā)現(xiàn)模型組相較于對照組NMDAR1和NMDAR2B蛋白水平表達(dá)明顯增多(P<0.05),且ApoE-/-模型組NMDAR2B蛋白表達(dá)量相較于WT型模型組和對照組均顯著增多(P<0.05),但ApoE-/-模型組和WT型模型組之間NMDAR1蛋白水平無顯著差異性(P>0.05);④各組之間培養(yǎng)液內(nèi)谷氨酸濃度無顯著差異性(P>0.05)。
結(jié)論:①NMDAR受
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