克拉霉素聯(lián)合頭孢呋辛對(duì)兩種細(xì)菌防耐藥突變濃度及體內(nèi)抗生素后效應(yīng)的影響.pdf

1、目的:探討克拉霉素、頭孢呋辛單用及合用對(duì)金黃色葡萄球菌和肺炎鏈球菌的體外抗菌作用、預(yù)防耐藥突變的能力和體內(nèi)抗生素后效應(yīng)。
　　方法:1.采用瓊脂平板倍比稀釋法和棋盤(pán)法分別測(cè)定克拉霉素、頭孢呋辛單用及聯(lián)用時(shí)對(duì)金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌的最小抑菌濃度(minimalinhibitory concentration，MIC)，并計(jì)算聯(lián)合指數(shù)(FIC):取濁度為1.0×107CFU·mL-1的菌懸液，分別接種于倍比稀釋的含不同濃度的克拉霉

2、素、頭孢呋辛及克拉霉素+頭孢呋辛的瓊脂平板上，每點(diǎn)接種1μl，放在35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～24h，觀察結(jié)果，肉眼觀察無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)的最低藥物濃度為MIC。
　　2.采用瓊脂平板倍比稀釋法和簡(jiǎn)易棋盤(pán)法測(cè)定克拉霉素、頭孢呋辛單用及聯(lián)用時(shí)對(duì)金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌的體外防耐藥突變濃度(mutantprevention concentrations，MPC)，并計(jì)算相應(yīng)的選擇指數(shù)SI(MPC/MIC):肉湯法富集1010 CFU·mL-1的

3、金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌菌懸液，取調(diào)好濁度的菌懸液0.1 ml分別加于倍比稀釋的含不同濃度的克拉霉素、頭孢呋辛及克拉霉素+頭孢呋辛的瓊脂平板上，用玻璃涂布器均勻涂布，37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h，以72 h無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)的最低藥物濃度為MPC。
　　3.建立粒細(xì)胞減少小鼠股部金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌感染模型，并且應(yīng)用平板菌落計(jì)數(shù)法測(cè)定克拉霉素、頭孢呋辛單用及聯(lián)合應(yīng)用對(duì)金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌的體內(nèi)抗生素后效應(yīng)(Post antib

4、iotic effect，PAE):在實(shí)驗(yàn)d1、d3，分別給小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺150 mg·kg-1、100 mg·kg-1，取去除抗生素的菌液0.1ml注入小鼠股部肌肉，于重建后0、1、2、3、4、6、8、10、12h分別處死6只小鼠，立即用預(yù)冷的滅菌生理鹽水按9∶1將小鼠股部肌肉制成勻漿，分別取10μl勻漿接種于M-H瓊脂平板，37℃孵育24 h，菌落計(jì)數(shù)得CFU·mL-1值，實(shí)驗(yàn)管與未加藥對(duì)照管細(xì)菌的CFU·mL-1值高于零時(shí)1

5、0倍所需要的時(shí)間差(h)即為體內(nèi)PAE。
　　結(jié)果:1.克拉霉素、頭孢呋辛單藥對(duì)金黃色葡萄球菌的MIC均為4.0μg·mL-1;聯(lián)合指數(shù)(FIC)為2.0，兩藥聯(lián)合后對(duì)金黃色葡萄球菌的體外抗菌效果為無(wú)關(guān)作用。克拉霉素、頭孢呋辛單藥對(duì)肺炎鏈球菌的MIC分別為0.0625μg·mL-1，16.0μg·mL-1;兩藥聯(lián)合指數(shù)(FIC)為2.0，聯(lián)合后對(duì)肺炎鏈球菌的體外抗菌效果為無(wú)關(guān)作用。
　　2.克拉霉素、頭孢呋辛單藥對(duì)金黃色葡萄

6、球菌的MPC分別是25.6μg·mL-1、51.2μg·mL-1; SI分別為6.4、12.8。聯(lián)合應(yīng)用使克拉霉素的MPC由單獨(dú)使用時(shí)的25.6μg·mL-1下降為8.0μg·mL-1，SI由單獨(dú)使用時(shí)的6.4下降到為聯(lián)用后的2.0;同時(shí)聯(lián)合應(yīng)用使頭孢呋辛的MPC由單獨(dú)使用時(shí)的51.2μg·mL-1下降為8.0μg·mL-1，SI由單獨(dú)使用時(shí)的12.8下降為聯(lián)用后的1.0。
　　克拉霉素、頭孢呋辛單藥對(duì)肺炎鏈球菌的MPC分別為10

7、24.0μg·mL-1、256.0μg·mL-1; SI分別為16384.0、16.0。聯(lián)合應(yīng)用使克拉霉素的MPC由單獨(dú)使用時(shí)的1024.0μg·mL-1下降為0.03125μg·mL-1，SI由單獨(dú)使用時(shí)的16384.0下降為聯(lián)用后的0.5;同時(shí)聯(lián)合應(yīng)用使頭孢呋辛的MPC由單獨(dú)使用時(shí)的256.0μg·mL-1下降為8.0μg·mL-1，SI由單獨(dú)使用時(shí)的16.0下降為聯(lián)用后的0.5。
　　3.克拉霉素、頭孢呋辛單用及聯(lián)用均對(duì)金黃

8、色葡萄球菌產(chǎn)生PAE。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，各組間比較差異均不顯著，克拉霉素與頭孢呋辛聯(lián)合應(yīng)用的PAE為無(wú)關(guān)作用。
　　克拉霉素、頭孢呋辛單用及聯(lián)用均對(duì)肺炎鏈球菌產(chǎn)生PAE。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，相同濃度不同藥物間PAE比較，在藥物濃度為2 MIC，4 MIC時(shí)，克拉霉素組與克拉霉素+頭孢呋辛組的PAE差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);在藥物濃度為8 MIC時(shí)，克拉霉素組分別與頭孢呋辛組、克拉霉素+頭孢呋辛組之間的PAE差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.

9、05)。相同藥物不同濃度間PAE比較，克拉霉素組各濃度間PAE無(wú)差別;頭孢呋辛組與克拉霉素+頭孢呋辛組，藥物濃度為2MIC，8MIC時(shí)PAE差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。在低濃度時(shí)(2 MIC和4 MIC)，克拉霉素+頭孢呋辛組的PAE呈相加作用;而在8 MIC時(shí)，克拉霉素+頭孢呋辛組的PAE為無(wú)關(guān)作用。
　　結(jié)論:1.克拉霉素、頭孢呋辛聯(lián)合后對(duì)金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌的體外抗菌效果呈無(wú)關(guān)作用，聯(lián)合應(yīng)用具有可行性。