馬鈴薯外敷藥膏對膝關(guān)節(jié)創(chuàng)傷性滑膜炎兔關(guān)節(jié)液中IL-1β、TNF-ɑ及血清中SOD、MDA影響機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　通過觀察“馬鈴薯外敷藥膏”（甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院推拿康復(fù)科自擬方，組方為：馬鈴薯+冰片+明礬）對膝關(guān)節(jié)創(chuàng)傷性滑膜炎模型兔滑膜的結(jié)構(gòu)變化及血清中SOD、MDA和關(guān)節(jié)液中IL-1β、TNF-ɑ的影響，探討中藥“馬鈴薯外敷藥膏”對膝關(guān)節(jié)創(chuàng)傷性滑膜炎干預(yù)的療效。
　　方法：
　　實(shí)驗(yàn)動物選用新西蘭大白兔40只，雌雄各半，3-4月齡，體重2.2-2.8kg，首先將其隨機(jī)分為2組：A空白組（10只）、另一組為B造模組

2、，造模成功后再將B造模組分為3組，分別為：C模型對照組（只造模不作任何治療），D扶他林乳膠劑對照組（模型制作成功后外敷扶他林乳膠劑干預(yù)5天）、E馬鈴薯外敷藥膏組（模型制作成功后外敷馬鈴薯外敷藥膏干預(yù)5天），每組10只新西蘭大白兔，單一使用右側(cè)膝關(guān)節(jié)，共40個關(guān)節(jié)。適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，將新西蘭大白兔固定，用8％的硫化鈉褪去右側(cè)后肢膝關(guān)節(jié)周圍的毛，用3%戊巴比妥鈉按lml/kg由耳緣靜脈緩慢推注麻醉（時間嚴(yán)格控制在不低于2min），用針灸針垂

3、直刺入各組新西蘭大白兔右側(cè)后肢股四頭肌和腓腸肌中點(diǎn)，連接“英迪”KWD一808一 I型脈沖針灸治療儀，通電，使用連續(xù)波波形，頻率始終保持為50Hz，強(qiáng)度固定在6.0mv(適宜造模動物的耐受強(qiáng)度，根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)的測定：若強(qiáng)度小于6.0mv，兔膝關(guān)節(jié)的屈伸幅度不大，不能達(dá)到模型建立的強(qiáng)度；若強(qiáng)度大于6.0mv易導(dǎo)致免肌肉痙攣,使關(guān)節(jié)處于強(qiáng)直狀態(tài)，從而影響模型建立），使造模動物膝關(guān)節(jié)不停地被動屈伸造成膝關(guān)節(jié)滑膜的損傷，每天2次，每次45min，連

4、續(xù)進(jìn)行10天，建立動物模型。造模開始后每天大體觀察測定兔造模肢膝關(guān)節(jié)周徑的變化、關(guān)節(jié)表面溫度等情況。制作馬鈴薯外敷藥膏(甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院推拿康復(fù)科自擬方)：將馬鈴薯洗凈，搗成泥，按一定比例均勻的撒上明礬和冰片（具體比例為：馬鈴薯：明礬：冰片=100:4:1），冷藏保存（制作一次馬鈴薯外敷藥膏最多為兩天用藥量）；動物給藥：模型建立后，D扶他林乳膠劑對照組造模膝關(guān)節(jié)外敷扶他林乳膠劑干預(yù)，按約4mm厚度均勻覆蓋造模關(guān)節(jié)表面，每天2次，敷

5、藥干預(yù)治療5天。將馬鈴薯外敷藥膏外敷E馬鈴薯外敷藥膏組受試兔膝關(guān)節(jié)損傷局部，每天敷藥2次，連續(xù)進(jìn)行治療5天；敷藥完成之后，將新西蘭大白兔股動脈取血，離心取上清液（離心操作條件具體為：3500r/min，10min），并把離心所得血清置于-20℃冷凍保存待用；新西蘭大白兔的處死采用空氣栓塞法，處死后用手術(shù)刀打開受試兔右膝關(guān)節(jié)囊，經(jīng)過大體的觀察記錄后，用lml生理鹽水灌洗關(guān)節(jié)腔，嚴(yán)格小心的收集關(guān)節(jié)液，置于已硅化試管中，離心(離心操作條件具體

6、為：4℃，1800r，10min),將上清液置于-70℃冷藏保存待用。取受試膝關(guān)節(jié)滑膜標(biāo)本，并放置于4%多聚甲醛中固定待用。制作常規(guī)病理切片，將滑膜進(jìn)行HE染色，觀察滑膜的結(jié)構(gòu)變化。結(jié)果檢測采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測白介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子（TNF-ɑ）、采用黃嘌呤氧化酶法（鹽酸羥胺法）檢測超氧化物歧化酶（SOD）含量、采用硫代巴比妥(TBA)法檢測丙二醛（MDA）的含量。對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用spss18.0軟件進(jìn)行

7、統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果：
　　1.造模后，膝關(guān)節(jié)創(chuàng)傷性滑膜炎模型組大白兔一般情況與空白組對比，膝關(guān)節(jié)有明顯腫脹、滑膜明顯增厚、關(guān)節(jié)表面溫度升高。（P<0.01）。
　　2.檢測后發(fā)現(xiàn)，造模大白兔與正常大白兔相比，TNF-α、IL-1β及MDA含量明顯升高，SOD活性明顯降低（P<0.01）；治療后，馬鈴薯外敷藥膏組大白兔關(guān)節(jié)液和血清中TNF-α、IL-1β及MDA的含量明顯低于模型組，SOD含量高于模型組（P<0.01）

8、，但馬鈴薯外敷藥膏組與扶他林乳膠劑對照組進(jìn)行比較分析，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.兔膝關(guān)節(jié)創(chuàng)傷性滑膜炎模型建立成功后，滑液中的促炎細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β及血清中的SOD、MDA均有明顯變化，說明膝關(guān)節(jié)創(chuàng)傷性滑膜炎的發(fā)病于促炎細(xì)胞因子密切相關(guān)。
　　2.馬鈴薯外敷藥膏能有效抑制促炎性因子TNF-α、IL-1β、MDA的表達(dá)，提升SOD的活性，在分子水平上揭示了馬鈴薯外敷藥膏對于膝關(guān)節(jié)創(chuàng)