2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:本研究中以人的結(jié)腸癌細(xì)胞SW620作為研究對象,采用精脒、DFMO以及2-DG作用于SW620后,綜合觀察它們對SW620細(xì)胞糖酵解的影響,并在此基礎(chǔ)上觀察SW620細(xì)胞內(nèi)HIF-1a的表達(dá)沉默后精脒能否促進(jìn)細(xì)胞的糖酵解。旨在于明確精脒對SW620細(xì)胞糖酵解的影響,并探討其促進(jìn)糖酵解的作用與HIF-1通路的相關(guān)性。
  方法:(1)用0~75μM不同濃度的精脒作用于細(xì)胞,MTT法檢測不同濃度的精脒作用24 h、48 h、72

2、 h后細(xì)胞的增殖率。(2)用(0.625、1.25、2.5)μM三種濃度的精脒分別作用于SW620細(xì)胞;2.5 mM DFMO分別與三種不同濃度的精脒共同作用于SW620細(xì)胞;2.5μM2-DG分別與三種不同濃度的精脒共同作用于SW620細(xì)胞,檢測不同組別下SW620細(xì)胞糖酵解指標(biāo)。(3)用連二亞硫酸鈉處理SW620細(xì)胞導(dǎo)致細(xì)胞缺氧,再用(0、0.625、1.25、2.5)μM三種濃度的精脒分別作用于缺氧條件下的SW620細(xì)胞,檢測在不

3、同濃度精脒作用下,SW620細(xì)胞糖酵解指標(biāo)。(4)選取有效的HIF-1α-siRNA片段對SW620細(xì)胞進(jìn)行瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,運(yùn)用real-time PCR技術(shù)檢驗(yàn)siRNA轉(zhuǎn)染的有效性;然后再用(0.625、1.25、2.5)μM三種濃度的精脒分別作用于HIF-1α表達(dá)被干擾的SW620細(xì)胞,檢測在不同濃度精脒作用下,SW620細(xì)胞糖酵解指標(biāo)。
  結(jié)果:(1)通過觀察細(xì)胞增殖率折現(xiàn)圖顯示,我們發(fā)現(xiàn)精脒為0.625、1.25、2.5μM

4、三種濃度時(shí),對細(xì)胞促增殖作用最為明顯,且藥物作用24 h后這三種濃度精脒的促增殖作用呈現(xiàn)明顯的上升趨勢。(2)加入精脒后,總體來看SW620細(xì)胞的葡萄糖消耗增多,乳酸產(chǎn)量升高,LDH活性增強(qiáng),ATP水平提高,Glut1、LDHA以及HIF-1α的蛋白水平明顯升高。而DFMO以及2-DG使細(xì)胞的這些糖酵解指標(biāo)降低。(3)缺氧導(dǎo)致細(xì)胞糖酵解水平升高,缺氧條件下加入精脒可以進(jìn)一步提高細(xì)胞的糖酵解水平。(4)HIF-1αsiRNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞株

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