黃芪丹參配伍改善微血管病變（虛瘀）與調(diào)節(jié)AQP1效應的研究.pdf

1、微血管病（Microvascular Diseases）是由于缺血（氧）、氧化應激、自身免疫等多種多樣的病因?qū)е挛⒀芗捌渲車M織的形態(tài)、結(jié)構(gòu)以及功能異常，進而引起組織器官損傷。常見微血管病變（Pathology of Microvascular，P-Mvc）的表現(xiàn)為：1、微血管運動功能及結(jié)構(gòu)異常：內(nèi)皮細胞損傷等；2、微血流異常：紅細胞聚集、血小板聚集和微小血栓形成、全血或血漿粘滯性增高。微血管壁的基本成分有[1]：內(nèi)皮細胞、基底膜、外

2、周細胞以及平滑肌細胞。位于血管腔表面的血管內(nèi)皮細胞（Vascular endothelial cell，VEC）屬于單層細胞，不僅是血液與血管壁之間的重要屏障、物質(zhì)轉(zhuǎn)運通道，還是內(nèi)分泌器官，對于血管中血液的流動性以及血管的舒縮功能具有不可替代的調(diào)節(jié)作用。VEC損傷在動脈粥樣硬化、高血壓、糖尿病、腦血管疾病等病理過程中起著非常重要的作用。已有研究證實，微血管病變的發(fā)生中伴隨著VEC損傷，VEC是微血管病變的核心病變位點。
　　中醫(yī)理

3、論認為“氣為血之帥，血為氣之母”，氣虛則不能推動血的運行，脈絡瘀阻，瘀阻日久，氣亦隨之而郁滯，耗傷氣血。而氣血的運行又與脈的功能狀態(tài)密切相關(guān)。脈為“血府”；保持脈道的完整性以及暢達性是保證氣血能夠進行正常運行的重要前提。現(xiàn)代研究表明，中醫(yī)的“脈”與現(xiàn)代醫(yī)學的VEC較之其他臟腑組織具有更強的相關(guān)性，氣虛血瘀證的發(fā)病原因也與VEC密切相關(guān)。“久病多虛多瘀”，VEC損傷日久，微血管病變相關(guān)因子之間平衡持續(xù)失調(diào)，患者體內(nèi)往往會存在血瘀的現(xiàn)象，呈

4、現(xiàn)不同水平的舌質(zhì)紫暗，舌下靜脈怒張等。《素問·調(diào)經(jīng)論篇》云[2]“病在脈、調(diào)之血，病在血、調(diào)之絡”?？梢罁?jù)益氣活血法的原則來辨治微血管病變。
　　水通道蛋白（Aquaporins，AQPs）是一組膜通道蛋白家族，參與跨膜水轉(zhuǎn)運，已發(fā)現(xiàn)AQP0~AQP12，共13種。AQP1是至今唯一發(fā)現(xiàn)在內(nèi)皮能夠表達的AQPs，在微血管內(nèi)皮中具有很高的表達（除了腦），可以起到非常重要的作用。研究表明AQP1不僅參與了高效跨膜水轉(zhuǎn)運，還與血管的形成

5、、內(nèi)皮細胞的遷移、血管舒縮等功能相關(guān)?？梢?，AQP1與VEC的功能密切相關(guān)。
　　黃芪與丹參是臨床上常用的具有“益氣活血”功效的代表藥對?，F(xiàn)代研究證實，黃芪與丹參均可保護VEC。本文旨在探討黃芪丹參不同配伍對微血管病變的改善作用及其機制，同時研究了黃芪丹參不同配伍對微血管病變大鼠肺臟以及腎臟AQP1表達的調(diào)節(jié)作用。現(xiàn)將研究結(jié)果匯報如下：
　　第一部分：黃芪丹參配伍對微血管病變大鼠血管內(nèi)皮細胞的保護作用
　　目的：

6、>　　1、應用限食、游泳及皮下注射腎上腺素的方法制造氣虛血瘀證大鼠模型。
　　2、氣虛血瘀證時存在微血管病變，黃芪丹參配伍對微血管病變是否存在改善作用。
　　方法：
　　將70只SD雄性大鼠隨機分配成7組，對照組、模型組、丹參組、黃芪組、黃芪丹參（1:1）組、黃芪丹參（2:1）組、黃芪丹參（4:1）組。除對照組外，所有大鼠進行限食、游泳及皮下注射腎上腺素，根據(jù)大鼠體重情況、精神狀態(tài)、舌質(zhì)、毛發(fā)等一般情況的改變及血液流變

7、學變化，判斷造模是否成功。使用ELISA方法來檢測大鼠血漿中內(nèi)皮素-1（ET-1）、一氧化氮（NO）、血栓素B2（TXB2）和6-酮-前列腺素-F1α（6-keto-PGF1α）含量。
　　結(jié)果：
　　模型組大鼠血液流變學參數(shù)和微血管病變相關(guān)因子與對照組比較，所產(chǎn)生的差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。與黃芪丹參（1:1）組、黃芪丹參（4:1）組比較，黃芪丹參（2:1）組血液流變學參數(shù)顯著下降（ P＜0.05）， NO、6-

8、keto-PGF1ɑ、6-keto-PGF1ɑ/TXB2顯著升高（P＜0.05），TXB2明顯降低（P＜0.05）。與黃芪丹參（4:1）組比較，黃芪丹參（2:1）組ET-1明顯降低（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、應用限食、游泳及皮下注射腎上腺素的方法成功建立氣虛血瘀證大鼠模型；
　　2、氣虛血瘀證大鼠存在微血管病變，黃芪丹參配伍可以改善微血管病變，其機制與
　　通過改善血管內(nèi)皮細胞功能或者結(jié)構(gòu)有關(guān)；其中以

9、黃芪丹參（2:1）組最佳。
　　第二部分：黃芪丹參配伍對微血管病變大鼠肺損傷及肺組織AQP1表達的調(diào)節(jié)作用
　　目的：
　　通過黃芪丹參配伍對于微血管病變大鼠肺組織損傷的改善及對AQP1表達的調(diào)節(jié)，驗證黃芪丹參配伍通過上調(diào)AQP1的表達減輕微血管病變大鼠肺組織損傷。
　　方法：
　　造模及分組方法同上。取大鼠肺組織，進行肺組織濕質(zhì)量／干質(zhì)量（W/D）測定；用HE染色法對肺組織病理形態(tài)學進行觀察；用Weste

10、rn blot檢測方法分析肺組織AQP1蛋白表達量；運用免疫組織化學檢測方法檢測各組肺組織的AQP1表達。結(jié)果：
　　肺組織W/D結(jié)果顯示：模型組相比于對照組肺組織W/D有了明顯增加（P＜0.05）；與其他各用藥組相比，黃芪丹參（2:1）組W/D明顯降低（P＜0.05）；HE染色結(jié)果：模型組：肺泡壁毛細血管擴張、淤血，肺泡壁出現(xiàn)廣泛增厚，部分肺泡出現(xiàn)擴張，組織可見有炎性細胞浸潤；黃芪丹參（2:1）組：幾乎接近對照組。AQP1表達：

11、在肺組織中，模型組AQP1表達量明顯下降（P＜0.05）。將黃芪丹參（2:1）組與其他各用藥組作比較，所表達出的AQP1量明顯升高（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　黃芪丹參配伍能夠減輕微血管病變大鼠肺組織損傷，其機制可能與上調(diào)大鼠肺組織AQP1的表達有關(guān)。
　　第三部分：黃芪丹參配伍對微血管病變大鼠腎損傷及腎組織AQP1表達的調(diào)節(jié)作用
　　目的：
　　通過黃芪丹參配伍對微血管病變大鼠腎組織損傷的改善及對A

12、QP1表達的調(diào)節(jié)，驗證黃芪丹參配伍通過上調(diào)AQP1表達改善微血管病變大鼠腎組織損傷。
　　方法：
　　造模及分組方法同上。用HE染色法對腎組織病理形態(tài)學進行觀察；用Western blot檢測方法分析腎組織AQP1蛋白表達量；用免疫組織化學檢測方法檢測各組腎組織的AQP1表達。
　　結(jié)果：
　　HE染色結(jié)果：模型組：腎小球囊腔消失，腎小球中毛細血管擴張，球內(nèi)可見大量紅細胞淤積，腎組織中可見大量腎小管管腔擴張，可見