AQP1與細(xì)胞死亡機(jī)制的關(guān)聯(lián)性研究.pdf

1、目的：水的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)對(duì)維持細(xì)胞的正常代謝具有重要的作用。1992年以來大量研究證實(shí)機(jī)體內(nèi)存在特異性的水通道蛋白家族(AQPs)。AQP1在體內(nèi)扮演著重要角色，參與滲透壓驅(qū)動(dòng)下的水的轉(zhuǎn)運(yùn)，介導(dǎo)藥理作用，參與水腫的形成等。但AQP1與自噬之間是否存在著聯(lián)系，現(xiàn)在還有爭(zhēng)議。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用AQP1的功能抑制劑HgCl2，抑制小鼠Balb/c3T3成纖維細(xì)胞的AQP1功能的表達(dá)。并通過觀察碘乙酰胺(IA)對(duì)這種AQP1功能表達(dá)受限制的細(xì)胞所造成的表型變

2、化，初步探討AQP1在細(xì)胞自噬中的作用，同時(shí)本實(shí)驗(yàn)還探討在細(xì)胞能量代謝發(fā)生障礙的情況下AQP1的表達(dá)變化，進(jìn)一步探討AQP1的功能。
　　 方法：
　　 實(shí)驗(yàn)分組：
　　 1、空白對(duì)照組：未加任何干擾因素；
　　 2、IA組：①未加入50μmol HgCl2直接加入IA組；②加入50μmol HgCl2抑制AQP1功能的表達(dá)后加入IA;
　　 3、魚藤酮組；加入0.5μmol魚藤酮4h,6h后檢測(cè)

3、AQP1蛋白表達(dá)量的變化；
　　 4、寡霉素組：加入不同濃度的寡霉素：10μmol和40μmol，4h，6h后檢測(cè)AQP1蛋白表達(dá)量的變化。
　　 Western Blot檢測(cè)LC3Ⅱ以及AQP1的蛋白表達(dá)量變化，比色法檢測(cè)CK活力的變化。
　　 結(jié)果：
　　 1、利用HgCl2抑制Balb/c3T3成纖維細(xì)胞AQP1功能后，加入IA利用Westernblot實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測(cè)LC3Ⅱ。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明加入HgCl

4、2的IA組，LC3Ⅱ的表達(dá)量增加。未加入HgCl2的IA組，LC3Ⅱ的表達(dá)沒有變化。
　　 2、Balb/c3T3成纖維細(xì)胞中加入呼吸鏈抑制劑魚藤酮后檢測(cè)AQP1的蛋白表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明加入魚藤酮后，4h AQP1的蛋白表達(dá)量與0h相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，6h AQP1的蛋白表達(dá)量與0h相比沒有明顯變化。
　　 3、加入呼吸鏈抑制劑寡霉素，濃度分別為10μmol和40μmol，4h、6h后檢測(cè)AQP1蛋白表達(dá)量的變化：(1

5、)10μmol組，4h AQP1的蛋白表達(dá)量與0h相比明顯增加，6h AQP1的蛋白表達(dá)量與0h相比明顯增加，6h AQP1的蛋白表達(dá)量與4h相比明顯增加。(2)40μmol組，4h AQP1的蛋白表達(dá)量與0h相比明顯增加，6h AQP1的蛋白表達(dá)量與0h相比明顯增加，6h AQP1的蛋白表達(dá)量與4h相比明顯增加。
　　 4、加入IA后，比色法檢測(cè)CK活力變化。隨著時(shí)間的增加，CK活力下降。
　　 結(jié)論：AQP1很可能通