甘草內(nèi)生菌與宿主不同提取物化痰止咳作用比較研究.pdf

1、目的：通過對甘肅野生與栽培烏拉爾甘草內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物以及甘草水煎液、總皂苷、總黃酮化痰和止咳作用的比較研究，觀察甘草內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物與甘草水煎液、總皂苷、總黃酮止咳化痰作用的差異，探討甘草內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物與宿主在止咳化痰方面是否具有相同的藥理活性，為發(fā)現(xiàn)甘草藥用資源提供新思路。
　　方法：
　　1.采用超聲提取法分別從野生、栽培甘草中提取總黃酮和總皂苷，紫外分光光度計檢測其含量；再利用萃取法分別從野生、栽培甘草提取液中分離出粗總黃

2、酮和粗總皂苷，紫外分光光度計檢測其純度。
　　2.采用小鼠氣管酚紅排泌量法，以酚紅排泌量測定甘草內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物及甘草水煎液、總黃酮、總皂苷的排痰量。采用建立痰濁阻肺大鼠模型，以大鼠一般情況變化、肺功能、肺組織病理變化、炎性因子TNF-α、COX-2、IL-17、IL-23等為指標(biāo)，觀察甘草內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物與甘草水煎液、總皂苷、總黃酮對痰濁阻肺型大鼠的干預(yù)和化痰作用的差異。
　　3.采用小鼠氨水引咳法和大鼠機(jī)械刺激引咳法，以小鼠

3、半數(shù)引咳時間（ET50）、R值和大鼠90min內(nèi)咳嗽次數(shù)等為指標(biāo)，觀察甘草內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物與甘草水煎液、總皂苷、總黃酮止咳作用的差異。
　　4.采用BLAST同源性比較法并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹對具有止咳或化痰作用的甘草內(nèi)生菌進(jìn)行鑒定。
　　結(jié)果：
　　1.檢測結(jié)果表明，野生甘草總皂苷含量為5.23mg·g-1，總黃酮含量為16.28mg·g-1；栽培甘草總皂苷含量為3.20mg·g-1，總黃酮含量為6.81mg·g-1。野生甘

4、草粗總皂苷含量434.64mg·g-1，純度為43.36％，粗總黃酮含量750.48mg·g-1，純度為75.05%；栽培甘草粗總皂苷含量445.88mg·g-1，純度為45.59%，粗總黃酮718.45mg·g-1，純度為71.85%。
　　2.化痰實(shí)驗(yàn)表明，JTYB029、JTZB005、JTZB006、JTZB058、JTZB060、JTZB063均能增加正常小鼠氣管酚紅排泌量（P＜0.05或0.01），化痰作用與甘草水煎液

5、、總黃酮、總皂苷組相當(dāng)。痰濁阻肺實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與模型組比較，JTYB029、JTZB005、JTZB006、JTZB058、JTZB063組大鼠的肺功能檢測各項(xiàng)指標(biāo)均有所上升，TNF-α、COX-2、IL-17、IL-23含量均降低（P＜0.05或P＜0.01），且對痰濁阻肺型大鼠的干預(yù)作用相當(dāng)于宿主甘草水煎液、總黃酮、總皂苷。JTYB029、JTZB005、JTZB006、JTZB058、JTZB063組大鼠肺組織可見支氣管上皮較模型

6、組完整，纖毛增多，支氣管管壁略有增厚，粘膜下炎細(xì)胞浸潤較模型組有所改善，肺泡腔輕度擴(kuò)大，肺間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤減輕。
　　3.止咳實(shí)驗(yàn)表明，甘草內(nèi)生菌JTYB029、JTZB005、JTZB006、JTZB043、JTZB060、JTZB063均能抑制機(jī)械刺激大鼠的90min內(nèi)咳嗽次數(shù)，具有止咳作用（P＜0.01或P＜0.05），且止咳作用與甘草水煎液、總皂苷、總黃酮作用相似。各內(nèi)生菌組均能延長氨水引咳小鼠ET50，JTZB005、JT

7、ZB006、JTZB014、JTZB020、JTZB043、JTZB060、JTZB063具有顯著作用（R>150%），JTYB006、JTZB058有一定作用（R>130%）。
　　4.JTYB029、JTZB005、JTZB006、JTZB043、JYZB058、JTZB060、JTZB063均為Bacteria;Firmicutes;Bacilli;Bacillales;Bacillaceae;Bacillus，即甘草內(nèi)生細(xì)

8、菌；厚壁菌門；芽孢桿菌綱；芽孢桿菌目；芽孢桿菌科；芽孢桿菌屬。
　　結(jié)論：
　　1.JTYB029、JTZB005、JTZB006、JTZB058、JTZB063等5株甘草內(nèi)生菌具有與宿主相同的化痰藥理活性，且對痰濁阻肺型大鼠肺功能和肺組織具有較好的改善作用。
　　2.JTYB029、JTZB005、JTZB006、JTZB043、JTZB060、JTZB063等6株甘草內(nèi)生菌具有與宿主相同的止咳藥理活性，且在一定環(huán)境

9、下止咳作用優(yōu)于或等同于其宿主水煎液、或總皂苷、或總黃酮。
　　3.綜合本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果，TYB029、JTZB005、JTZB006、JTZB063等4株甘草內(nèi)生菌與其宿主甘草具有相同的止咳和化痰藥理活性，提示在止咳化痰作用方面，JTYB029可替代野生甘草，JTZB005、JTZB006、JTZB063可替代栽培甘草。
　　4.具有止咳或化痰作用的7株甘草內(nèi)生菌（JTYB029、JTZB005、JTZB006、JTZB043、