小鼠肺臟固有淋巴樣細(xì)胞亞群應(yīng)對(duì)低溫環(huán)境的變化模式及玉屏風(fēng)散的保護(hù)作用.pdf

1、目的：肺臟是維持氣體交換的重要生命器官，其局部組織免疫細(xì)胞，特別是固有免疫細(xì)胞可敏感應(yīng)對(duì)外部環(huán)境帶來(lái)的各種挑戰(zhàn)（如溫度變化、塵埃污染和病原微生物等），以保障肺臟局部免疫系統(tǒng)穩(wěn)定;一旦免疫細(xì)胞應(yīng)對(duì)失控，則會(huì)導(dǎo)致免疫紊亂，引發(fā)多種疾病。低溫環(huán)境極易引發(fā)多種呼吸系統(tǒng)疾病的發(fā)生，與低溫環(huán)境下肺臟免疫紊亂密切相關(guān)。固有淋巴樣細(xì)胞(innate lymphoid cells，ILCs)是新近發(fā)現(xiàn)的類天然免疫細(xì)胞，廣泛分布于肺臟粘膜屏障。ILCs對(duì)肺

2、臟微環(huán)境的平衡與穩(wěn)定、抵御外界環(huán)境變化有著重要意義。目前，關(guān)于ILCs對(duì)外界低溫環(huán)境的敏感性及其變化模式，以及由此對(duì)肺臟乃至整體免疫功能產(chǎn)生怎樣影響尚無(wú)報(bào)道。玉屏風(fēng)散(YPF)為中醫(yī)扶正固表之明方，常用于防治呼吸道疾病，但YPF靶向ILCs的藥理機(jī)制尚不明了。因此，本研究目的是:采用低溫小鼠模型，觀察低溫環(huán)境中肺臟ILC1、ILC2、ILC3等亞群的變化，同時(shí)探討YPF靶向ILCs的免疫保護(hù)作用。
　　方法：⑴中藥YPF的制備:根

3、據(jù)YPF經(jīng)典配方組成配伍方藥，采用傳統(tǒng)水提醇沉法制備YPF制劑；⑵低溫小鼠模型的建立及YPF的干預(yù)方法:將小鼠置于低溫裝置(10±1℃)中建立低溫小鼠模型;模型小鼠通過(guò)飲用YPF制劑進(jìn)行藥物干預(yù)；⑶觀察各組小鼠外周血血細(xì)胞成分的變化；⑷采用流式細(xì)胞胞內(nèi)外染色技術(shù)分別檢測(cè)小鼠脾臟、肺臟T淋巴細(xì)胞和ILCs各亞群的比例和絕對(duì)數(shù)的變化；⑸采用RT-PCR法檢測(cè)肺臟ILCs各亞群功能因子(IFN-γ、IL-5、IL-13、IL-17A）的轉(zhuǎn)錄水

4、平的變化；⑹HE染色法觀察YPF干預(yù)前后模型小鼠肺組織形態(tài)學(xué)改變；⑺采用RT-PCR檢測(cè)肺組織中IL-12、CXCL-10、CCL-20、IL-25等細(xì)胞因子和趨化因子mRNA的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：①低溫環(huán)境下，小鼠外周血白細(xì)胞數(shù)顯著下降（P＜0.01），淋巴細(xì)胞數(shù)亦隨之下降(P＜0.01)，嗜酸性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞計(jì)數(shù)也顯著降低（P＜0.01）;同時(shí)，小鼠脾臟ILCs細(xì)胞比例和細(xì)胞絕對(duì)數(shù)顯著下降(P＜0.05)。低溫環(huán)境下，整體

5、免疫系統(tǒng)處于免疫抑制狀態(tài)，其中，ILCs細(xì)胞最為敏感。②低溫環(huán)境下，小鼠肺臟ILCs絕對(duì)數(shù)顯著降低(P＜0.01)，其中，ILC1的比例及絕對(duì)數(shù)均顯著降低(P＜0.05)，ILC2和ILC3的比例顯著升高（P＜0.05）;ILC1的特征因子IFN-γ mRNA表達(dá)顯著下降(P＜0.05)，ILC2的特征性因子IL-5、IL-13 mRNA水平顯著上升(P＜0.01)。低溫下肺臟呈現(xiàn)ILC1弱勢(shì)、ILC2優(yōu)勢(shì)的免疫微環(huán)境。肺臟組織中參與I

6、LC亞群分化和募集的細(xì)胞因子和趨化因子IL-12、CXCL-10、CCL-20、IL-25、IL-33和CXCL-2的表達(dá)均顯著上調(diào)(P＜0.05)。③與低溫模型組比較，YPF用藥實(shí)驗(yàn)組，肺臟T淋巴細(xì)胞和ILCs細(xì)胞絕對(duì)數(shù)目均出現(xiàn)顯著增多(P＜0.05)。其中ILC1比例顯著升高(P＜0.01)，ILC2比例顯著降低(P＜0.05);ILC1和ILC3的細(xì)胞絕對(duì)數(shù)顯著升高(P＜0.05);ILC1功能因子IFN-γ表達(dá)顯著升高(P＜0.

7、05)，ILC2功能因子IL-5、IL-13的表達(dá)顯著減少（P＜0.01）。ILC亞群功能分化相關(guān)因子IL-12、CCL-20和IL-25的表達(dá)顯著下調(diào)(P＜0.05)。
　　結(jié)論：⑴低溫環(huán)境下小鼠整體免疫功能處于抑制狀態(tài)，其中，ILCs最為敏感。⑵低溫環(huán)境可誘導(dǎo)小鼠肺臟ILCs的免疫失衡，ILC1處于劣勢(shì)，可導(dǎo)致肺臟抗感染、抗病毒能力下降;而ILC2處于優(yōu)勢(shì)，是肺臟嗜酸性粒細(xì)胞大量浸潤(rùn)的主因，并可增加肺臟罹患過(guò)敏性疾病的風(fēng)險(xiǎn)。⑶