白術(shù)、玉屏風(fēng)散和增液湯的口服免疫佐劑作用研究.pdf

1、疫苗免疫接種是防治動(dòng)物傳染病的一個(gè)重要手段,但在很多情況下動(dòng)物注射疫苗后不能產(chǎn)生有效的免疫應(yīng)答。因此,如何提高動(dòng)物疫苗的免疫效果是畜牧業(yè)生產(chǎn)上的一個(gè)重要問(wèn)題。研究發(fā)現(xiàn)一些中藥可以增強(qiáng)機(jī)體的免疫機(jī)能,從而提高疫苗的免疫效果。浙江省出產(chǎn)的道地藥材“浙八味”久負(fù)盛名,它們是白術(shù)、白芍、浙貝母、杭白菊、延胡索、玄參、麥冬,溫郁金八味中藥材。本論文系統(tǒng)研究浙八味中藥以及含浙八味中藥的玉屏風(fēng)散和增液湯的口服免疫佐劑作用,為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)浙八味中藥提供參

2、考。1.浙八味中藥對(duì)小鼠注射模式抗原卵清白蛋白(OVA)的口服佐劑作用比較
　　 目的：篩選浙八味中具有口服免疫佐劑作用的中藥。
　　 方法：以雌性ICR小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,將浙八味設(shè)為高、中、低三個(gè)劑量水平,每只小鼠分別灌胃0.25 mL不同水平的中藥,每日一次,連續(xù)給藥4 d,然后分別在第5 d和第25 d進(jìn)行皮下注射抗原OVA,并在二免后2周進(jìn)行眼眶采血。
　　 結(jié)果：與對(duì)照組相比,浙八味中的白術(shù)能顯著提高OV

3、A受免小鼠血清中OVA特異性IgG總抗體及抗體亞類IgG2a、IgG2b和IgG3抗體水平(P＜0.05)。麥冬、玄參可以顯著增強(qiáng)小鼠血清中OVA特異性IgG總抗體水平(P＜0.05)。此外,在試驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)浙貝母的毒性較大,灌胃1g/只即可導(dǎo)致小鼠死亡。2.玉屏風(fēng)散煎劑對(duì)口蹄疫疫苗免疫的口服佐劑作用
　　 目的：探討中藥復(fù)方玉屏風(fēng)散及其麥冬加味對(duì)O型口蹄疫疫苗的免疫佐劑作用。
　　 方法：將21只ICR小鼠隨機(jī)分為3組

4、,每組7只,分別為對(duì)照組、玉屏風(fēng)散組和玉屏風(fēng)散加麥冬組。將玉屏風(fēng)散及其加味制成生藥濃度為2 g/mL的藥液,每只小鼠灌胃給藥1次(0.25 mL),24 h后經(jīng)腹股溝皮下注射FMD疫苗(0.2mL/只),2周后同樣方法加強(qiáng)免疫一次。二免后3周采血和取脾臟,用間接ELISA檢測(cè)血清中特異性IgG抗體及其亞類,用MTT法檢測(cè)淋巴細(xì)胞增殖情況。
　　 結(jié)果：二免后各給藥組小鼠血清中FMDV特異性IgG抗體及其IgG抗體亞類水平和淋巴細(xì)

5、胞刺激指數(shù)均顯著高于對(duì)照組(P＜0.05),而玉屏風(fēng)散和玉屏風(fēng)散加麥冬兩組間的抗體水平以及淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)均未見(jiàn)顯著性差異(P＞0.05)。3.增液湯煎劑對(duì)口蹄疫疫苗免疫的口服佐劑作用
　　 目的：探討中藥復(fù)方增液湯(由玄參、麥冬和生地組成)及其單味中藥對(duì)O型口蹄疫疫苗的免疫調(diào)節(jié)作用。
　　 方法：將40只ICR小鼠隨機(jī)分為5組,每組8只,分別為對(duì)照組、單味中藥組和增液湯組。每只小鼠于免疫注射前24h灌胃給藥一次,劑量為

6、0.25 mL/只,然后對(duì)所有小鼠經(jīng)腹股溝皮下注射O型FMD疫苗免疫,2周后加強(qiáng)免疫一次,二免后3周眼眶采血。
　　 結(jié)果：與對(duì)照組相比,口服麥冬和生地均能顯著提高免疫O型FMD商品苗的小鼠血清中FMDV特異性IgG總抗體水平以及FMDV特異性IgG1和lgG2a抗體亞類水平(P＜0.05)；但是增液湯組無(wú)論在調(diào)節(jié)IgG總抗體水平方面,還是其對(duì)抗體亞類的影響方面,與對(duì)照組均未見(jiàn)顯著性差異(P＞0.05)。4.白術(shù)水煎劑對(duì)小鼠注射

7、模式抗原卵清白蛋白(OVA)的口服佐劑作用
　　 目的：探討白術(shù)對(duì)模式抗原卵清白蛋白(Ovalbumin,OVA)的口服佐劑作用。
　　 方法：選取48只ICR小鼠,隨機(jī)分為6組,每組8只,雌雄各半,采用單因素多水平實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),各組小鼠分別灌服0.05 g、0.1 g、0.2 g、0.4 g或0.8g/只劑量的白術(shù)水煎劑或者生理鹽水,連續(xù)給藥4 d后,分別于試驗(yàn)的第5 d和第25 d分別進(jìn)行皮下注射免疫,二免后2周眼眶采血

8、并取脾臟。
　　 結(jié)果：與對(duì)照組相比,白術(shù)水煎劑(0.1 g、0.2 g、0.4 g和0.8 g)能夠顯著的提高小鼠血清中IgG總抗體滴度(P＜0.05),0.2 g、0.4 g和0.8 g的白術(shù)水煎劑均可顯著地提高小鼠血清中OVA特異性IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3的水平(P＜0.05)。灌胃0.1 g、0.2 g、0.4 g及0.8 g白術(shù)水煎劑也可以顯著增強(qiáng)小鼠的脾臟淋巴細(xì)胞受刺激物刺激后的刺激指數(shù)(P＜0.0

9、5),其中0.2 g白術(shù)水煎劑灌胃后,小鼠脾臟淋巴細(xì)胞受ConA刺激后分泌的IL-5和IFN-γ均顯著地高于對(duì)照組(P＜0.05)。5.白術(shù)水煎劑對(duì)口蹄疫疫苗免疫的口服佐劑作用
　　 目的：探討白術(shù)對(duì)O型口蹄疫疫苗免疫的口服佐劑作用。
　　 方法：將35只ICR雌性小鼠隨機(jī)分為5組,每組7只,采用單因素多水平實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),分別設(shè)0.0625g、0.125 g、0.25 g及0.5 g白術(shù)水煎劑組和生理鹽水組。按上述劑量分別灌

10、胃小鼠,連續(xù)給藥4 d,在試驗(yàn)的第5 d、第25 d分別免疫O型FMD疫苗,3周后眼眶采血并取脾臟。
　　 結(jié)果：0.25 g和0.5 g劑量的白術(shù)水煎劑,可以顯著提高免疫O型FMD疫苗小鼠血清中FMDV特異性抗體滴度水平和FMDV特異性IgG抗體亞類水平(P＜0.05)。與對(duì)照組相比,不同劑量的白術(shù)水煎劑均能顯著增強(qiáng)脾臟淋巴細(xì)胞在刺激物作用下的刺激指數(shù)(P＜0.05),其中,灌胃0.25 g白術(shù)水煎劑可以提高脾臟淋巴細(xì)胞在Co

11、nA刺激下分泌IL-5和IFN-γ的能力(P＜0.05),因此0.25 g或0.5/只·d可以作為提高FMD疫苗佐劑效果的參考劑量。在此基礎(chǔ)上,我們研究了不同的灌胃天數(shù),即1 d、2 d和4 d,對(duì)O型FMD疫苗的免疫佐劑作用效果的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)2 d和4 d的效果相對(duì)較好。6.日糧添加白術(shù)對(duì)口蹄疫疫苗免疫的口服佐劑作用
　　 試驗(yàn)一
　　 目的：用不同的加工方法(粉碎或煎煮)對(duì)白術(shù)進(jìn)行處理后,按1％的生藥量比例添加到飼

12、料中,探討其對(duì)O型口蹄疫疫苗免疫的佐劑作用。
　　 方法：試驗(yàn)設(shè)免疫前飼喂一周和全程飼喂(共飼喂6周)兩個(gè)不同的時(shí)間,按照兩因素三水平析因?qū)嶒?yàn)設(shè)計(jì)方法,將試驗(yàn)分為:對(duì)照組、粉碎-1周組、粉碎-6周組、煎煮-1周組和煎煮-6周組。試驗(yàn)用O型FMD疫苗免疫小鼠兩次,間隔2周,二免后3周眼眶采血并取脾臟。
　　 結(jié)果：與對(duì)照組相比,飼喂添加1％白術(shù)水煎劑的日糧6周的處理組小鼠血清中FMDV特異性IgG抗體水平和抗體亞類水平(P

13、＜0.05)顯著提高,對(duì)ConA和LPS刺激的脾臟淋巴細(xì)胞增殖有明顯促進(jìn)作用(P＜0.05),并能顯著地增強(qiáng)脾臟淋巴細(xì)胞受ConA刺激后分泌IL-5和IFN-γ的能力,表明該實(shí)驗(yàn)組對(duì)O型FMD疫苗具有有較好的免疫增強(qiáng)作用。
　　 試驗(yàn)二
　　 目的：試驗(yàn)采用煎煮法加工的白術(shù),按5％的比例添加到飼料中,探討其對(duì)O型口蹄疫疫苗免疫的口服佐劑作用。
　　 方法：采用單因素多水平實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),分別飼喂2 d、4 d和6 d,

14、用O型FMD疫苗免疫小鼠兩次,間隔2周,二免后3周眼眶采血并取脾臟和小腸。
　　 結(jié)果：用添加5％白術(shù)的飼料飼喂小鼠2 d、4 d和6 d后,與對(duì)照組相比,各組小鼠血清中FMDV特異性IgG抗體水平和抗體亞類水平均顯著升高,刺激物作用后的脾臟淋巴細(xì)胞的刺激指數(shù)和ConA刺激后脾臟淋巴細(xì)胞中IL-5和IFN-γ的分泌量也顯著上升(P＜0.05)。用添加5％白術(shù)的飼料飼喂小鼠2 d后,在第一次免疫FMD疫苗后1周和二免后3周的小鼠小

15、腸IgA分泌細(xì)胞的陽(yáng)性率高于對(duì)照組,說(shuō)明口服白術(shù)具有增強(qiáng)機(jī)體黏膜免疫反應(yīng)的作用。
　　 綜上所述,淅八味中的麥冬、玄參、白術(shù)具有口服免疫佐劑作用,可以提高ICR小鼠對(duì)于OVA免疫的體液免疫反應(yīng)水平。進(jìn)一步的研究表明,口服一定劑量的白術(shù)能提高ICR小鼠對(duì)于模式抗原OVA和FMD疫苗免疫的特異性體液免疫和細(xì)胞免疫水平,能同時(shí)上調(diào)Th1/Th2型免疫應(yīng)答；日糧添加白術(shù)飼喂小鼠,能提高FMD疫苗的免疫效果,提高動(dòng)物機(jī)體的體液免疫、細(xì)胞免