熒光光譜法測定生物大分子的研究及應用.pdf

1、蛋白質和核酸是構成機體的兩種重要的生物大分子。核酸是生物基本遺傳物質，與生物生長、發(fā)育及癌變、突變等異?；顒酉嚓P；蛋白質則負責各種生理功能，維持生物體新陳代謝活動，是生物性狀直接表達者。它們是生物化學與生命科學中重要的兩類生物大分子。因此研究機體分子結構、功能以及定性和定量分析，已成為當前生物分析化學研究的前沿熱點之一。
　　 本文以熒光、共振散射技術為主要研究手段，建立快速靈敏的檢測蛋白質與核酸新方法，同時應用TEM、吸收光譜

2、技術等手段進行機理研究和探討。
　　 本文共分為五部分，第一部分綜述了生物大分子熒光探針以及納米粒子作為光譜探針在生物分析中的研究進展及分析應用。
　　 在論文的第二部分，研究了桑色素-Al(Ⅲ)-蛋白質體系的熒光增強效應，建立了蛋白質測定的新方法。本研究發(fā)現(xiàn)，BSA的加入可以顯著增加桑色素-Al(Ⅲ)的熒光強度，據(jù)此建立了一種檢測蛋白質的快速、靈敏、簡便的熒光光譜法。在最佳實驗條件下體系的熒光強度與蛋白質的濃度在一定范

3、圍內呈良好的線性關系，檢出限可達10-9gmL-1，并成功應用于實際樣品的檢測中。機理研究表明桑色素的羥基與Al(Ⅲ)配位形成桑色素-Al(Ⅲ)配合物，由于Al(Ⅲ)的架橋作用，產(chǎn)生大的聚合體，導致體系熒光強度的增強，求得能量轉移率E=0.75。
　　 在論文的第三部分，研究發(fā)現(xiàn)蛋白質可以顯著增強槲皮素-Al(Ⅲ）體系的熒光，從而建立了一個測定蛋白質的新體系。在最佳條件下，BSA與EA分別在1.0×10-8～3.0×10-7g·

4、ml-1和5.0×10-8～4.5×10-7g·ml-1范圍內與熒光強度呈良好的線性關系，檢出限分別為2.3×10-9和1.0×10-8g·mL-1，并且該體系穩(wěn)定性好選擇性高。研究了槲皮素、Al(Ⅲ)與BSA的作用機理，發(fā)現(xiàn)槲皮素、Al(Ⅲ)生成二元復合物，再與BSA結合，生成槲皮素-Al(Ⅲ)-BSA聚集體。
　　 在論文的第四部分，研究了桑色素、nanoTiO2和核酸的相互作用。研究發(fā)現(xiàn)核酸可以顯著增強nanoTiO2-桑

5、色素的熒光強度，且體系的熒光強度與核酸的濃度在一定范圍內呈良好的線性關系。據(jù)此建立了測定核酸的新方法。ctDNA和yRNA的線性范圍分別為：2.0×10-8～2.2×10-7g·mL-1和1.0×10-8～2.5×10-7g·mL-1;檢出限分別為4.8×10-9g·mL-1和1.2×10-9g·mL-1，并成功應用于實際樣品酵母RNA的測定。
　　 在論文的第五部分，研究了核酸對Al(Ⅲ)-nanoTiO2體系共振光散射強度的