環(huán)磷腺苷葡胺聯合粒細胞集落刺激因子對舒張性心力衰竭大鼠心功能的影響及其機制探討.pdf

1、目的:通過觀察環(huán)磷腺苷葡胺(MCA)聯合粒細胞集落刺激因子(G-CSF)對舒張性心力衰竭（DHF）大鼠心臟功能及cAMP/PKA信號通路、骨髓間充質干細胞(BMSCs)心肌特異性基因mRNA和蛋白表達水平、心肌細胞凋亡相關基因蛋白的表達以及血清標志物腦鈉肽(BNP)、糖類抗原CA125(CA125)、超敏C反應蛋白（hs-CRP）、血管緊張素(ANG-2)水平的影響，探討MCA聯合G-CSF對DHF大鼠心功能的影響及其可能機制。

2、　　方法:取成功建模后的60只SD雄性大鼠分為4組，空白對照組(Control)、舒張性心力衰竭模型組(Model)、環(huán)磷腺苷葡胺治療組(MCA)及環(huán)磷腺苷葡胺聯合粒細胞集落刺激因子治療組(MCA+G-CSF)，各組分別給與相應的藥物干預。干預15天后，超聲心動圖與BL-420F生理記錄儀測定心臟功能，免疫組化檢測各組大鼠心肌細胞形態(tài)學變化;采用RT-PCR和Western blot法分別檢測骨髓間充質干細胞(BMSCs)心肌特異性基因

3、GATA結合蛋白4（GATA-4）、縫隙連接蛋白43(Cx43)、心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTNI)及干細胞受體蛋白c-kit表達水平;心肌細胞抗凋亡基因BcL-2與促凋亡基因Bax的表達水平，ELISA測定細胞內環(huán)磷酸腺苷（cAMP）水平和BNP、CA125、hs-CRP、ANG-2水平，流式細胞儀檢測BMSCs細胞分化。
　　結果:首先，通過模擬大鼠DHF病理狀態(tài)，對其血流動力學分析發(fā)現單獨MCA治療與MCA聯合G-CSF治療能顯著提

4、高DHF大鼠心臟的舒張功能，同時也提高它們的收縮功能;通過超聲心動圖檢測發(fā)現MCA和G-CSF主要通過降低DHF大鼠的LVDd和LVM指標來改善心臟功能;通過組織學切片研究發(fā)現DHF大鼠心肌組織出現纖維化、壞死、水腫、肌源纖維斷裂、排列混亂等，而MCA能夠降低心肌細胞水腫，G-CSF能夠促進心肌細胞再生，從而恢復心臟功能。
　　其次，通過檢測心肌特異表達基因及其蛋白的變化情況，發(fā)現DHF大鼠Model組較Control組GATA-

5、4、Cx43基因表達和蛋白量明顯升高（P＜0.05），MCA組和MCA聯合G-CSF組的GATA-4、Cx43基因和蛋白表達較Model組大鼠又有顯著上升(P＜0.05），心肌特異蛋白cTNI與干細胞受體c-kit蛋白的變化趨勢與GATA-4、Cx43一致，這從蛋白水平上說明了MCA和G-CSF通過促進心肌特異性基因及蛋白的表達，促進心肌細胞的發(fā)育，恢復DHF大鼠的心臟功能。MCA和G-CSF通過提高細胞內cAMP水平來提高心肌細胞的存

6、活率，MCA聯合G-CSF在增加細胞內cAMP水平上具有顯著作用。
　　第三，DHF大鼠抗凋亡基因BcL-2及其蛋白表達降低，而促進心肌細胞凋亡的Bax基因和蛋白的含量則明顯上升(P＜0.05)，說明是由于BcL-2的表達下降與Bax的表達上升導致了心肌細胞出現凋亡、壞死、水腫、肌源纖維斷裂、排列混亂和心肌組織纖維化等現象，而MCA能夠在mRNA水平和蛋白水平上促進BcL-2的表達，抑制Bax的表達，MCA聯合G-CSF對這兩個基

7、因及蛋白的表達促進和抑制作用更為顯著，從而降低心肌細胞的凋亡，改善心力衰竭大鼠的心臟功能。
　　最后，血清中相關因子BNP、CA125、hs-CRP、ANG-2水平在心力衰竭大鼠血清中含量最高，當使用MCA及MCA聯合G-CSF藥物干預時BNP、CA125、hs-CRP、ANG-2因子水平下降明顯(P＜0.05），其中MCA聯合G-CSF使用時下降最為顯著(P＜0.05)。對各組BMSCs分化情況分析發(fā)現，Control組細胞分化

8、程度最低，Model組、MCA組、MCA+G-CSF組分化程度依次升高，這與上述心肌特異性基因的表達情況相一致。
　　結論:MCA聯合G-CSF可明顯改善DHF大鼠心臟功能;通過cAMP/PKA途徑促進心肌細胞發(fā)育早期基因GATA-4、Cx43表達，促使BMSCs向心肌細胞方向分化;能夠調控心肌細胞凋亡基因表達，延緩心肌細胞凋亡;明顯降低血清BNP、CA125、hs-CRP、ANG-2水平;MCA聯合G-CSF治療DHF大鼠療效明