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1、藥物與血清白蛋白之間的相互作用決定著藥物在體內(nèi)的有效濃度,影響著藥物在體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)性質(zhì),因此藥物與血清白蛋白相互作用是藥物研發(fā)階段需要考察的重要性質(zhì)之一。目前常用來(lái)研究藥物與血清白蛋白相互作用的方法有熒光光譜法、高效液相色譜法和毛細(xì)管電泳方法等,其中毛細(xì)管電泳法因分離效率高、成本低、樣品消耗量少等優(yōu)點(diǎn)而備受關(guān)注。但毛細(xì)管電泳法中蛋白質(zhì)在毛細(xì)管內(nèi)壁的非特異性吸附是一個(gè)亟待解決的問(wèn)題,因?yàn)榈鞍踪|(zhì)的非特異性吸附不僅會(huì)影響峰形、降低
2、分離效率,而且會(huì)干擾目標(biāo)體系的相互作用,對(duì)結(jié)果產(chǎn)生不利影響?;谏鲜隹紤]本研究工作擬通過(guò)聚多巴胺(polydopamine,PDA)輔助共沉積法制備基于聚(2-甲基-2-噁唑啉)(poly(2-methyl-2-oxazole),PMOXA)的抗蛋白質(zhì)吸附的涂層毛細(xì)管,并將該涂層毛細(xì)管用于前沿分析毛細(xì)管電泳(frontal analysis capillary electrophoresis,F(xiàn)ACE)法測(cè)定對(duì)乙酰氨基酚(acetami
3、nophen,APAP)與牛血清白蛋白(bovine serumalbumin,BSA)的相互作用參數(shù)。
本研究首先合成了星形聚合物聚乙烯亞胺-接枝-聚(2-甲基-2-噁唑啉)(poly(ethylene imine)-graft-poly(2-methyl-2-oxazoline),PEI-g-PMOXA),并通過(guò)PDA輔助共沉積在熔融硅毛細(xì)管內(nèi)壁形成PEI-g-MOXA與PDA復(fù)合的聚合物涂層,即PEI-g-PMOXA/P
4、DA涂層。SEM實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明PEI-g-PMOXA參與了PDA的沉積過(guò)程,涂層管內(nèi)表面的電滲流性質(zhì)也證實(shí)了在毛細(xì)管內(nèi)壁形成了PEI-g-PMOXA/PDA涂層。
由此形成的PEI-g-PMOXA/PDA涂層管用于分離4種模型堿性蛋白質(zhì)(細(xì)胞色素c、溶菌酶、α胰凝乳蛋白酶原A和核糖核酸酶A),所得峰的理論塔板數(shù)達(dá)105量級(jí),約是裸管分離結(jié)果的10倍;而且連續(xù)分離30次,4種蛋白質(zhì)的遷移時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)均小于0.7%,
5、遠(yuǎn)小于在裸管中的結(jié)果(約5.7%),說(shuō)明PEI-g-PMOXA/PDA涂層管具有良好的穩(wěn)定性和優(yōu)異的抗蛋白質(zhì)吸附性能。
基于其良好的穩(wěn)定性和抗蛋白質(zhì)吸附性能,PEI-g-PMOXA/PDA涂層管被用于FACE法測(cè)定APAP與BSA之間相互作用的參數(shù),在25℃、25 mMTris/HCl緩沖溶液(pH7.4)中測(cè)得二者之間的結(jié)合常數(shù)(Ka)為1.39×104 M-1,結(jié)合位點(diǎn)數(shù)(n)為1.08。重復(fù)性實(shí)驗(yàn)中,連續(xù)3次分析Ka和n
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