幾種黃酮類藥物小分子與牛血清白蛋白相互作用的研究.pdf

1、黃酮類化合物是廣泛存在于自然界中的一類天然活性物質(zhì),對(duì)多種疾病具有良好的療效。研究黃酮類藥物小分子與血清白蛋白生物大分子的結(jié)合,對(duì)于藥物代謝動(dòng)力學(xué)、生物化學(xué)、制藥學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)具有重要的參考價(jià)值,能為其提供重要的生理參數(shù)和藥物指標(biāo)。本文選取牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)為模型蛋白質(zhì),應(yīng)用熒光光譜、紫外吸收光譜等方法對(duì)BSA與8種不同結(jié)構(gòu)的黃酮類藥物槲皮素(Quercetin,QU)、楊梅素(Myricet

2、in,MY)、二氫槲皮素(Dihydroquercetin,DOU)、二氫楊梅素(Dihydromyricetin,DMY)、表兒茶素沒食子酸酯(Epicatechin gallate,ECG)、表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallocatechin gallate,EGCG)、表沒食子兒茶素(Eoigallocatechin EGC)及沒食子兒茶素(Gallocatechin GC)相互作用的機(jī)理進(jìn)行了研究。主要研究內(nèi)容如下:

3、r>　　 (1)采用熒光發(fā)射光譜、紫外光譜、同步熒光光譜等技術(shù)研究了模擬生理?xiàng)l件下二氫楊梅素與牛血清白蛋白的相互作用及金屬離子對(duì)結(jié)合的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,二氫楊梅素通過靜態(tài)猝滅機(jī)理猝滅了牛血清白蛋白的內(nèi)源熒光。并計(jì)算了15℃、25℃和37℃三個(gè)不同溫度下二氫楊梅素與牛血清白蛋白相互作用的猝滅常數(shù)Ksv、結(jié)合常數(shù)Ka及結(jié)合位點(diǎn)數(shù)n；分析了二氫楊梅素對(duì)牛血清白蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)的影響,并根據(jù)熱力學(xué)參數(shù)推斷了作用力本質(zhì)主要是疏水作用和靜電作用；通

4、過熒光光譜和紫外吸收光譜的重疊光譜可以得到分子間結(jié)合的空間距離為3.43 nm；Co2+、Cu2+、Ni2+和K+的存在均增加了DMY-BSA體系的結(jié)合常數(shù),尤其是Cu2+的存在可使結(jié)合常數(shù)增大兩個(gè)數(shù)量級(jí)。
　　 (2)利用熒光光譜研究了模擬生理?xiàng)l件下槲皮素、楊梅素以及它們對(duì)應(yīng)的氫化物二氫槲皮素、二氫楊梅素這四種結(jié)構(gòu)相似的黃酮醇藥物分子與牛血清白蛋白的結(jié)合情況,探討了黃酮醇藥物分子C環(huán)氫化及B環(huán)羥基數(shù)目對(duì)其與BSA相互作用的影響

5、。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,除二氫槲皮素外,其他三種黃酮醇均能顯著猝滅牛血清白蛋白的內(nèi)源熒光,結(jié)合常數(shù)分別為1.84×108(MY)、3.82×107(QU)和1.36×104L.mol-1(DMY)。這說明具有相同A環(huán)和B環(huán)結(jié)構(gòu)的黃酮醇,其C環(huán)氫化后將削弱其與BSA的作用,導(dǎo)致結(jié)合常數(shù)降低4個(gè)數(shù)量級(jí)；具有相同A環(huán)和C環(huán)結(jié)構(gòu)的黃酮醇,B環(huán)上羥基數(shù)目的增加將增強(qiáng)其與BSA的作用,且增加一個(gè)羥基可以提高結(jié)合常數(shù)1個(gè)數(shù)量級(jí)。
　　 (3)選取兒茶

6、素中具有代表性的表兒茶素沒食子酸酯(ECG)作為研究對(duì)象,利用熒光光譜法研究模擬生理pH條件下三種不同溫度(17℃,27℃,37℃)及四種不同金屬離子(Co2+,Zn2+,Cu2+,Ni2+)對(duì)其與BSA結(jié)合的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,金屬離子的存在并未改變猝滅類型,但增強(qiáng)了ECG對(duì)BSA的熒光猝滅效應(yīng),且使結(jié)合過程中的主要作用力由疏水作用力變?yōu)殪o電作用力；Ni2+、Cu2+增加了ECG.BSA復(fù)合物的結(jié)合常數(shù),而Co2+、Zn2+降低了EC