基于microcarrier 6人胃癌正常免疫小鼠模型的建立及病理特征探討.pdf

1、研究目的
　　基于新型微載體(microcarrier6)復合人胃癌MKN45細胞接種于具有正常免疫功能的小鼠，以期建立新型人胃癌正常免疫小鼠移植瘤模型，并探討其病理學特征。
　　研究方法
　　將60只雄性C57BL/6小鼠隨機分成3組，2D組、對照組和3D組，每組20只;2D組只接種MKN45細胞，對照組只接種微載體，3D組接種細胞-微載體復合體。將人胃癌MKN45細胞與microcarrier6共培養(yǎng)建立三維腫瘤細

2、胞培養(yǎng)體系，采用皮下接種法將細胞-微載體復合體接種于C57BL/6小鼠皮下建立小鼠移植瘤模型。觀察記錄小鼠一般狀況及瘤體生長情況，統(tǒng)計成瘤時間及成瘤率，分別于接種第10、20、30天分三批處死荷瘤小鼠并對瘤組織進行病理學檢查。采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料數(shù)據(jù)以(x)±s表示，采用獨立樣本t檢驗進行組間比較，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　研究結果
　　1.基于microcarrier6體外建立M

3、KN45細胞三維培養(yǎng)體系:2D環(huán)境下觀察MKN45細胞貼壁，呈不規(guī)則形;microcarrier6鏡下觀察為不規(guī)則團狀或長梭狀，質(zhì)地疏松;MKN45細胞與microcarrier6共培養(yǎng)24h后可以看到MKN45細胞可以很好的貼附在microcarrier6上，接種均勻，達到飽和。
　　2.動物生存及成瘤情況:2D組和對照組小鼠食欲和活動度沒有明顯變化，第10天開始，3D組小鼠活動稍減少;各組食欲、毛發(fā)、體質(zhì)量無明顯差異;實驗過程

4、中沒有小鼠死亡。對照組和2D組小鼠均未成瘤，3D組小鼠在接種后8～10d即可觸及皮下腫塊，2周左右肉眼可觀察到皮下有隆起包塊，腫塊生長迅速，3周左右即可達到0.5～1 cm3體積，成瘤率為80％（16/20只）。
　　3.病理學檢查:HE染色后光鏡下可見大量雜亂排列、大小不一、異形性明顯的細胞，并向周圍脂肪、肌肉組織浸潤生長;伴有明顯壞死，主要位于腫瘤中央，以20天處死組最為顯著;10天處死組未被清除的部分microcarrier

5、6被包繞形成肉芽腫，20天時仍可見少許microcarrier6，30天時microcarrier6基本被清除干凈;各組移植瘤組織中新生毛細血管豐富，多位于腫瘤邊緣。免疫組化染色結果顯示，CA199、CEA、COX-2、CK-7均為陽性表達，進一步證實異形性細胞為人腫瘤細胞。
　　研究結論
　　本實驗成功基于microcarrier6復合人胃癌MKN45細胞在正常免疫小鼠中建立了人胃癌小鼠移植瘤模型，且移植瘤的病理學特征符合