DOCK8缺陷小鼠哮喘模型建立與過(guò)敏機(jī)制探討及CD3ε免疫缺陷病臨床、免疫學(xué)特征分析.pdf

1、第一部分DOCK8缺陷小鼠哮喘模型建立與過(guò)敏機(jī)制探討
　　目的：建立DOCK8缺陷小鼠哮喘易感模型并檢測(cè)DOCK8缺陷哮喘小鼠與野生對(duì)照哮喘小鼠氣道炎癥反應(yīng)、外周血以及脾內(nèi)IgE+B細(xì)胞百分比，探討IgE的變化在DOCK8缺陷小鼠哮喘模型過(guò)敏性炎癥中的意義及與IL-21的關(guān)系。
　　方法：將6周清潔級(jí)DOCK8 KO小鼠（C57BL/6）和野生小鼠（C57BL/6）隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組（KO-ova），野生對(duì)照組（WT-ova）、

2、KO對(duì)照組（KO-con）和空白對(duì)照組（WT-con），實(shí)驗(yàn)組和野生對(duì)照組給予小劑量OVA致敏和激發(fā)，KO對(duì)照組和空白對(duì)照組用PBS代替。在最后1次激發(fā)后的24 h內(nèi)檢測(cè)4組小鼠支氣管肺泡灌洗液（BALF）中IgE絕對(duì)值、細(xì)胞總數(shù)及細(xì)胞分類計(jì)數(shù)；有創(chuàng)肺功能儀檢測(cè)小鼠氣道高反應(yīng)性；HE染色制作小鼠肺組織病理切片，光鏡下觀察病理變化；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小鼠外周血和脾臟中 IgE+B細(xì)胞百分比。實(shí)驗(yàn)組、野生對(duì)照組和KO對(duì)照組分別在第一次激發(fā)后前3

3、天、后3天和全6天給予20ng/天IL-21治療后重復(fù)觀察以上指標(biāo)。
　　結(jié)果：哮喘模型實(shí)驗(yàn)組（KO-ova）BALF細(xì)胞總數(shù)(6.15±0.9，n=8,P＜0.05)明顯高于其他3組(3.08±0.4,1.98±0.6,1.91±0.2,％,n=8,P＜0.05)；嗜酸性粒細(xì)胞比例、氣道高反應(yīng)性與肺部炎癥反應(yīng)也相應(yīng)增高；野生對(duì)照組（WT-ova）與KO對(duì)照組（KO-con）和空白對(duì)照組（WT-con）比，氣道炎癥反應(yīng)有升高趨勢(shì)，

4、氣道高反應(yīng)性基本無(wú)改變；實(shí)驗(yàn)組（ KO-ova）外周血及脾臟中 IgE+B細(xì)胞明顯高于其他3組（ blood3.12±0.3 vs1.12±0.11,1.25±0.3,0.59±0.05,spleen2.01±0.13 vs0.81±0.06,0.78±0.09,0.43±0.06,%, n=8,P＜0.05%, n=8,P＜0.05）；而給予IL-21治療后，除外氣道高反應(yīng)性，其他各項(xiàng)指標(biāo)均降低且結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中治療期為第一次激

5、發(fā)后的前3天和全6天的小鼠治療效果尤佳。
　　結(jié)論：DOCK8缺陷小鼠哮喘易感模型建立成功，跟野生小鼠比DOCK8缺陷小鼠有哮喘易感性，且相同刺激條件下過(guò)敏性炎癥更重，而該易感性可能與其體內(nèi)IgE升高有關(guān)；IL-21治療DOCK8缺陷哮喘小鼠可降低其IgE與炎癥反應(yīng)，其機(jī)制可能與IL-21 IgE抗體類別轉(zhuǎn)換有關(guān)。
　　第二部分：CD3ε缺陷致重癥聯(lián)合免疫缺陷病1例臨床及免疫學(xué)特征分析
　　目的：探討1例由11q23染

6、色體CD3E基因突變導(dǎo)致CD3ε缺陷重癥聯(lián)合免疫缺陷病臨床特征及免疫表型。
　　方法：收集近期就診于重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院的1例疑診CD3ε缺陷致重癥聯(lián)合免疫缺陷病患兒外周血標(biāo)本，提取外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）及核酸，CDR3掃描譜型技術(shù)分析T淋巴細(xì)胞受體（TCR）多樣性，定量PCR檢測(cè)TCR重排剪切環(huán)（TREC）含量，二代測(cè)序篩查免疫相關(guān)基因，一代測(cè)序驗(yàn)證。
　　結(jié)果：TCR Vβ亞家族表現(xiàn)為單克隆或寡克隆峰提示TCR

7、重組受限；定量PCR未檢測(cè)到TREC含量提示TCR重組及T細(xì)胞胸腺輸出嚴(yán)重受損；二代測(cè)序顯示 CD3E基因復(fù)合雜合突變，一代測(cè)序驗(yàn)證證實(shí)。
　　結(jié)論：通過(guò)臨床及免疫學(xué)分析、二代測(cè)序篩查及一代測(cè)序證實(shí)，確診1例CD3E基因復(fù)合雜合突變致CD3ε缺陷重癥聯(lián)合免疫缺陷病，該病例罕見(jiàn)且臨床與免疫學(xué)表型復(fù)雜，臨床診斷存在困難，導(dǎo)致漏診與延遲診斷，死亡率高且均為早期死亡，干細(xì)胞移植或基因治療是其唯一的根治手段，因此提高臨床工作者對(duì)本病的認(rèn)識(shí)對(duì)