肥胖參與胃癌發(fā)生及進(jìn)展的臨床和基礎(chǔ)研究.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述：
　　第一部分
　　萎縮性胃炎，腸上皮化生和胃粘膜上皮內(nèi)瘤變被證實是胃癌的癌前疾病，并且其進(jìn)展為胃癌的幾率逐次升高，被認(rèn)為是胃癌發(fā)生的“級聯(lián)反應(yīng)”。在這些病變中，胃粘膜上皮內(nèi)瘤變（尤其是高級別瘤變）被認(rèn)為是進(jìn)展為胃癌的最后一步。但是，關(guān)于胃粘膜上皮內(nèi)瘤變尤其是高級別瘤變的危險因素目前人沒有被充分闡述。肥胖已經(jīng)被證實是多種惡性腫瘤發(fā)生的危險因素，包括胃癌、乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌、結(jié)直腸癌、食

2、管癌、肝癌、胰腺癌、膽囊癌及腎癌。高膽固醇血癥已經(jīng)被證實是多種疾病尤其是心血管疾病的危險因素。除此之外，一些研究也證實了較低的血清膽固醇水平可能增加癌癥病人的死亡率。同時，高血清膽固醇水平也被證實與胃癌的發(fā)生相關(guān)，特別是腸型胃癌。但是，肥胖和血清膽固醇水平與胃粘膜上皮內(nèi)瘤變之間風(fēng)險關(guān)系目前還沒有被詳細(xì)的研究。
　　研究目的：
　　研究肥胖、血清總膽固醇水平與胃粘膜上皮內(nèi)瘤變之間的風(fēng)險關(guān)系
　　研究方法：
　　回顧

3、性分析北京協(xié)和醫(yī)院2000年1月-2015年12月胃粘膜上皮內(nèi)瘤變的患者及同期健康對照人群，采集相關(guān)人群體重指數(shù)(body mass index，BMI)和血清總膽固醇水平，計算相關(guān)風(fēng)險因素的OR值和相應(yīng)的95％可信區(qū)間(95％ confidence intervals，CI)。
　　研究結(jié)果：
　　(1)在校正了年齡、吸煙史、酗酒史、胃癌或食管癌家族史以及血清總膽固醇水平之后，肥胖（BMI ranging from27.5

4、 to29.9）被證實是胃粘膜上皮內(nèi)瘤變的危險因素(adjusted OR=1.87 for men with95％ CI of1.24-2.81; adjusted OR=2.72 for women with95％ CI of1.44-5.16)。但是對于超重（BMI ranging from23.0 to27.4）和重度肥胖(BMI=30.0 or more)而言，在矯正年齡、吸煙史、酗酒史、胃癌或食管癌家族史以及血清總膽固醇水平

5、之后，沒有發(fā)現(xiàn)其是胃粘膜上皮內(nèi)瘤變的危險因素。
　　(2)高血清總膽固醇血癥(＞4.55mmol/L)可以增加女性胃粘膜上皮內(nèi)瘤變的發(fā)病風(fēng)險(adjusted OR=1.83，95％ CI=1.25-2.69)。但與男性胃粘膜上皮內(nèi)瘤變的發(fā)病無關(guān)。
　　研究結(jié)論：
　　(1)27.5≤BMI＜30是男性胃粘膜上皮內(nèi)瘤變的獨立危險因素。
　　(2)27.5≤BMI＜30是女性胃粘膜上皮內(nèi)瘤變的獨立危險因素。

6、　　(3)血清總膽固醇水平＞4.45mmol/L是女性胃粘膜上皮內(nèi)瘤變的獨立危險因素。
　　第二部分
　　研究目的：
　　研究NUCKS1在胃癌中的功能及其具體的作用機(jī)制。
　　研究方法：
　　(1)收集北京協(xié)和醫(yī)院胃腺癌癌石蠟標(biāo)本及相應(yīng)癌旁組織標(biāo)本;應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測NUCKS1蛋白在組織及癌旁組織的表達(dá);研究中分類變量的比較采用chi-square檢驗;NUCKS1在胃癌及癌旁組織的表達(dá)差異的檢測采

7、用Mann-WhitneyU檢驗。使用Kaplan-Meier法構(gòu)建生存曲線，同時組間生存差異的比較采用Log-rank檢驗。而后我們采用Cox regression進(jìn)行危險因素的單因素分析和多因素分析以評估NUCKS1蛋白在胃癌患者總生存期和無病生存期中的作用。
　　(2)采用wetem blot檢驗NUCKS1在幾種常用胃癌細(xì)胞系中的表達(dá)，采用小干擾RNA(Sma11 interfering RNA，siRNA)敲低SGC-7

8、901和NCI-N87細(xì)胞系中NUCKS1的表達(dá)，或用質(zhì)粒載體在AGS細(xì)胞系中過表達(dá)NUCKS1;Transwell法檢測各組胃癌細(xì)胞的遷移、侵襲能力;CCK8法檢測相關(guān)胃癌細(xì)胞的增殖能力;流式細(xì)胞儀檢測胃癌細(xì)胞的細(xì)胞周期分布情況及凋亡情況;Western blotting法檢測與遷移、侵襲及細(xì)胞周期有關(guān)的蛋白MMP-2、MMP-9和KLF4的表達(dá)。
　　(3)敲低或過表達(dá)NUCKS1后，采用wetern blot檢驗PI3K/A

9、kt/mTOR信號通路中關(guān)鍵分子的表達(dá)。然后，在AGS中過表達(dá)NUCKS1后敲低IGF-1R后，用之前方法檢測細(xì)胞增殖、遷移、侵襲能力及PI3K/Akt/mTOR信號通路的抑制情況。隨后，使用免疫組化檢驗人胃腺癌組織中IGF-1R與NUCKS1表達(dá)的相關(guān)性，同時使用雙熒光素酶報告基因檢測NUCKS1對IGF-1R轉(zhuǎn)錄的調(diào)控情況。
　　研究結(jié)果：
　　(1)NUCKS1蛋白在人胃腺癌組織中的高表達(dá)率為42％，高于癌旁組織的12

10、.2％(P＜0.001)。同時， NUCKS1在病理分級G3-G4級(P=0.021)，或Lauren分型彌漫型(P=0.042)，或有脈管浸潤(P=0.036)，或TNM分期Ⅲ期期(P=0.006)的胃腺癌組織中表達(dá)明顯升高。此外，NUCKS1高表達(dá)組胃癌患者的5年總生存率(overallsurvival，OS)是16.7％，顯著低于NUCKS1正常表達(dá)者(55.2％，P＜0.001)，同時NUCKS1高表達(dá)患者5年無病生存率為18.

11、6％, NUCKS1正常表達(dá)患者為53.4％，兩組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)。
　　(2)Western blot顯示NUCKS1在胃癌細(xì)胞株SGC-7901，NCI-N87和MGC-803中陽性表達(dá)，在胃癌細(xì)胞株AGS和HGC-27及胃粘膜上皮永生化細(xì)胞GES-1低表達(dá)。使用siRNA敲低NUCKS1后，SGC-7901和NCI-N87細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力得到削弱，細(xì)胞周期阻滯在G1/G0期，細(xì)胞凋亡率增加。使用

12、質(zhì)粒載體過表達(dá)NUCKS1后，AGS細(xì)胞的的增殖、遷移和侵襲能力得到增強(qiáng)，細(xì)胞周期中G1/G0期的比例減少。同時，高表達(dá)NUCKS1后，體內(nèi)實驗證實腫瘤增殖加快。
　　(3)使用siRNA在AGS-NUCKS1中敲低IGF-1R后，細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力得到削弱，細(xì)胞周期G1/G0期比例升高，細(xì)胞凋亡率增加。過表達(dá)NUCKS1后，westernblot顯示PI3K/Akt/mTOR信號通路中關(guān)鍵分子表達(dá)水平升高，繼而敲低IGF

13、-1R后，相關(guān)分子表達(dá)水平下降。免疫組化顯示在人胃腺癌組織中IGF-1R的表達(dá)與NUCKS1的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.6237，P＜0.001)。雙熒光素酶報告基因顯示過表達(dá)NUCKS1可增強(qiáng)IGF-1R啟動子的活性(P=0.011)
　　研究結(jié)論：
　　(1)NUCKS1蛋白在人胃腺癌組織中高表達(dá)，其表達(dá)水平與胃癌患者病理分級、TNM分期、Lauren分型及脈管浸潤呈正相關(guān)。同時，NUCKS1高表達(dá)作為胃癌患者的預(yù)后不良的獨

14、立危險因子。
　　(2)NUCKS1可作為癌基因促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲及成瘤能力。
　　(3)NUCKS1可正向調(diào)控IGF-1R的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而激活PI3K/Akt/mTOR信號通路在胃癌細(xì)胞中行使癌基因的功能。
　　第三部分
　　研究目的：
　　研究新輔助化療對進(jìn)展期胃癌的作用及新輔助化療前后T分期降期對進(jìn)展期胃癌患者預(yù)后的預(yù)測作用
　　研究方法：
　　回顧性分析我院2007年2月至201

15、7年3月180例進(jìn)展期胃癌行新輔助化療的病歷資料，分析新輔助化療對T3-4期進(jìn)展胃癌患者預(yù)后的影響。同時，評價新輔助化療后T分期降期對T3-4期胃癌預(yù)后的預(yù)測作用。
　　研究結(jié)果：
　　(1)男性占70％(126/180)，女性占30％(54/180)。年齡19-82歲，平均年齡59±11.86歲。R0切除者166例，占92.2％?；颊咂骄邮?-5周期的新輔助化療。術(shù)中清掃淋巴結(jié)5-77枚，平均28枚，淋巴結(jié)陽性者占68％

16、(100/148)。220例患者新輔助化療后評價為CR(完全緩解)者6例，PR(部分緩解)者91例，SD(疾病穩(wěn)定)者63例，PD(疾病進(jìn)展)者20例?；熡行?CR+PR)為53.9％(97/180)，疾病控制率(CR+PR+PD)為88.9％(160/180)。在接受新輔助化療及根治性手術(shù)的患者中，有156人(94％)基線T分期為T3-4。在這156人中，67人經(jīng)過新輔助化療T分期降期為ypT0-2(42.9％)，術(shù)后病理分期為y

17、pT3-4的病人為89人(57.1％)。
　　(2)對于cT3-4期進(jìn)展期胃癌患者，新輔助化療組五年總生存率為50.6％，對照組五年總生存率為42.5％，兩組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.046)。新輔助化療組五年無病生存率為55.2％，對照組五年無病生存率為40.4％，兩組差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.007)
　　(3)生存分析結(jié)果顯示降期組（病理結(jié)果示降期至ypT0-T2）五年總生存率為81.9％，未降期組（病理結(jié)果示