骨膜蛋白促進(jìn)惡性腦膜瘤侵襲與增殖的相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、研究背景與目的：
　　腦膜瘤是起源于蛛網(wǎng)膜帽狀細(xì)胞的顱內(nèi)最常見的非神經(jīng)上皮性腫瘤。絕大多數(shù)腦膜瘤為良性腫瘤（WHOⅠ級(jí)），但仍然有高達(dá)25％左右的腦膜瘤為非典型腦膜瘤（WHOⅡ級(jí)）和惡性腦膜瘤（WHOⅢ級(jí)）。惡性腦膜瘤的預(yù)后最差，中位生存期僅為1.5年，總體復(fù)發(fā)率高達(dá)80％，腫瘤的病理分級(jí)和侵襲是影響復(fù)發(fā)和預(yù)后的關(guān)鍵因素。因此，尋找新的有效治療方法成為了目前改善惡性腦膜瘤預(yù)后的首要目標(biāo)。
　　在我們的前期研究中，發(fā)現(xiàn)骨膜蛋白

2、（periostin，POSTN）在不同級(jí)別中的腦膜瘤間質(zhì)中呈不同程度的表達(dá)，并且其表達(dá)量也隨著病理等級(jí)的增高而增高。骨膜蛋白作為一種細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)蛋白，可與整合素受體相結(jié)合，參與腫瘤微環(huán)境的調(diào)控，促進(jìn)腫瘤的侵襲與增殖，導(dǎo)致腫瘤發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)等惡性行為。但骨膜蛋白在腦膜瘤中的作用及分子機(jī)制尚未有研究報(bào)道。

3、>　　本項(xiàng)研究通過對(duì)骨膜蛋白在惡性腦膜瘤中的分子機(jī)制的研究，探討了促進(jìn)其侵襲和增殖的信號(hào)通路及關(guān)鍵蛋白，可為惡性腦膜瘤的綜合治療提供潛在的治療靶點(diǎn)及新的啟示。
　　研究?jī)?nèi)容與方法：
　　1.惡性腦膜瘤原代細(xì)胞的培養(yǎng)與鑒定
　　收集新鮮標(biāo)本進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng)并純化，觀察原代細(xì)胞形態(tài)，測(cè)定增殖能力，免疫熒光鑒定細(xì)胞。
　　2.骨膜蛋白對(duì)惡性腦膜瘤細(xì)胞功能及表型的研究
　　不同級(jí)別的腦膜瘤組織進(jìn)行qRT-PCR和W

4、estern-blot檢測(cè)POSTN的表達(dá)量，免疫組化法觀察POSTN在不同級(jí)別腦膜瘤中的表達(dá)程度及在惡性腦膜瘤中的表達(dá)部位，Spearman相關(guān)性檢測(cè)法檢測(cè)POSTN與惡行腦膜瘤侵襲的相關(guān)性，Western-blot檢測(cè)分離純化后的惡性腦膜瘤細(xì)胞與腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞中POSTN的表達(dá)量。
　　3.骨膜蛋白影響惡性腦膜瘤惡性表型的機(jī)制研究
　　原代培養(yǎng)的惡性腦膜瘤細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染過表達(dá)POSTN病毒與空載病毒，Western-b

5、lot檢測(cè)兩組細(xì)胞EMT相關(guān)蛋白的變化情況以及Akt、pAkt的變化情況。
　　研究結(jié)果：
　　1.原代培養(yǎng)的腦膜瘤細(xì)胞經(jīng)鑒定EMA及Vimentin表達(dá)陽(yáng)性，惡性腦膜瘤原代細(xì)胞增殖能力強(qiáng)于良性腦膜瘤細(xì)胞，良性腦膜瘤細(xì)胞中β-半乳糖苷酶染色陽(yáng)性率更高。
　　2.惡性腦膜瘤中POSTN蛋白水平和mRNA水平表達(dá)都高于良性腦膜瘤(P＜0.01)，POSTN與惡性腦膜瘤侵襲顯著相關(guān)(r=0.738，p＜0.001)，POST

6、N表達(dá)于惡性腦膜瘤的間質(zhì)中，原代培養(yǎng)中的成纖維細(xì)胞POSTN含量高于腦膜瘤細(xì)胞(P＜0.01)。
　　3.惡性腦膜瘤細(xì)胞過表達(dá)POSTN后E-ca明顯下調(diào)，N-ca、p-Akt、Vimentin、Snail明顯上調(diào)(P＜0.001);增殖能力及侵襲能力增強(qiáng)(P＜0.001)。
　　研究結(jié)論：
　　惡性腦膜瘤與良性腦膜瘤相比，具備更強(qiáng)的增殖能力，也更具有侵襲性，這可能是導(dǎo)致高級(jí)別腦膜瘤預(yù)后更差的原因。由高級(jí)別腦膜瘤中的腫