二氫辣椒堿通過NFIA-NF-κB途徑抑制促炎因子的表達.pdf

1、背景：
　　動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是影響人類健康的一種全身性的慢性疾病，其主要臨床并發(fā)癥如中風(fēng)、心肌梗死、心衰等的發(fā)病率正逐年上升。研究已表明，炎癥反應(yīng)貫穿了AS發(fā)生發(fā)展的全部階段，包括從斑塊的形成到破裂。但目前針對AS的治療仍主要集中于降低血清中的脂質(zhì)水平。近年來針對AS過程中的炎癥介質(zhì)的治療正逐漸增多。
　　二氫辣椒堿(dihydrocapsaicin，DHC)是從紅辣椒中提取的辛辣成分之一

2、，具有鎮(zhèn)痛、抗癌、抗氧化等多種藥理和生理學(xué)作用。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，DHC能夠通過過氧化物酶體增殖物激活受體γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ，PPARγ)/人肝Ⅹ受體α(LiverⅩReceptorα，LⅩRα)通路減少高脂飲食條件下apoE-/-基因敲除小鼠斑塊的形成，同時下調(diào)小鼠體內(nèi)促炎因子表達水平。同時本課題組還發(fā)現(xiàn)在HepG2細(xì)胞系中DHC能夠通過抑制叉頭框蛋白a2(f

3、orkhead box a2，F(xiàn)oxa2)并增強LⅩRα的表達從而下調(diào)載脂蛋白M(apolipoprotein M，apoM)的表達。因此，DHC具有預(yù)防心血管疾病特別是抗AS的作用。但是有關(guān)DHC對于炎癥方面的具體影響目前仍未可知，DHC影響促炎因子表達的具體機制也尚不明確。
　　結(jié)果：
　　1、DHC能夠上調(diào)NFIA的表達并抑制NF-κB和促炎因子的表達
　　本研究發(fā)現(xiàn)，在轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平上，DHC均能夠濃度依賴

4、性地上調(diào)THP-1巨噬細(xì)胞中核轉(zhuǎn)錄因子ⅠA(nuclear factorⅠA，NFⅠA)的表達并抑制核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）的表達。利用脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)誘導(dǎo)了THP-1巨噬細(xì)胞腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factorα，TNF-α)、白細(xì)胞介素(interleukin，IL)-1β及IL-6分泌的增多，而DHC抑制了細(xì)胞對于這些促炎因子的分泌。

5、將apoE-/-基因敲除小鼠隨機分為DHC組和對照組，并分別經(jīng)口腔灌胃給藥DHC或無膽固醇植物油。免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，實驗組小鼠主動脈竇部位NFⅠA表達上調(diào)而NF-κB的表達下調(diào)，同時免疫印跡結(jié)果顯示主動脈組織中TNF-α、IL-1β及IL-6蛋白水平均有所下調(diào)。
　　2、NFⅠA能夠抑制NF-κB及促炎因子的表達
　　通過慢病毒過表達NFⅠA后，THP-1巨噬細(xì)胞中NF-κB水平下調(diào)。利用LPS誘導(dǎo)THP-1巨

6、噬細(xì)胞促炎因子分泌，過表達NFⅠA后，培養(yǎng)基中細(xì)胞分泌的促炎因子TNF-α、IL-1β及IL-6表達水平相較于單純LPS誘導(dǎo)組有所下調(diào)。體內(nèi)實驗發(fā)現(xiàn)，經(jīng)慢病毒過表達NFⅠA的apoE-/-小鼠主動脈竇部位NF-κB表達水平較低，同樣主動脈組織中促炎因子TNF-α、IL-1β及IL-6的表達也低于對照組。
　　3、DHC通過增強NFⅠA抑制了NF-κB的表達及活性，并最終抑制了促炎因子的表達
　　免疫印跡結(jié)果顯示，DHC能夠下

7、調(diào)THP-1巨噬細(xì)胞中NF-κB的表達，而通過慢病毒過表達NFⅠA后，DHC導(dǎo)致的NF-κB的下調(diào)作用有所增強。DHC能夠上調(diào)NF-κB抑制劑(inhibitor of NF-κB，IκB)α的表達，同時過表達NFⅠA后，DHC對IκBα的上調(diào)作用更為增強。DHC抑制了NF-κB的活性，同時過表達NFⅠA后，DHC抑制NF-κB活性的效應(yīng)更為顯著。同樣，在THP-1巨噬細(xì)胞中，過表達NFⅠA后DHC對于促炎因子釋放的抑制效應(yīng)更為明顯。過

8、表達NFⅠA的同時采用小分子RNA干擾技術(shù)敲減NF-κB的水平，我們發(fā)現(xiàn)NFⅠA對促炎因子釋放的抑制作用更為顯著，因此NF-κB可能參與了NFⅠA對于促炎因子的調(diào)控。最后，我們通過小鼠體內(nèi)實驗也證實了過表達NFⅠA后能夠增強DHC對于小鼠血清中促炎因子表達的抑制作用。
　　結(jié)論：
　　DHC能夠通過增強NFⅠA進而抑制NF-κB的表達及活性，并最終抑制促炎因子的分泌。本研究發(fā)現(xiàn)了DHC影響促炎因子分泌的分子機制，為DHC作為