超聲靶向微泡破壞對(duì)PEX基因轉(zhuǎn)染鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的
　?。?）采用聲諾維（SonoVue）聯(lián)合超聲輻照介導(dǎo)PEX基因轉(zhuǎn)染鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞，旨在探討其可行性以及PEX基因?qū)κ竽z質(zhì)瘤C6細(xì)胞的影響。
　　（2）將超聲靶向微泡破壞與脂質(zhì)體聯(lián)合來(lái)增強(qiáng) PEX基因在鼠膠質(zhì)瘤 C6細(xì)胞的轉(zhuǎn)染，旨在探討超聲靶向微泡破壞增強(qiáng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的可行性及優(yōu)勢(shì)所在。
　　方法
　?。?）體外生長(zhǎng)良好的鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞經(jīng)0.25％胰酶消化計(jì)數(shù)后，按照2×105/孔的密度接種于6孔板，分為

2、空白對(duì)照組、超聲+微泡組、質(zhì)粒組、質(zhì)粒+微泡組、質(zhì)粒+超聲組、質(zhì)粒+超聲+微泡組。超聲輻照參數(shù)為頻率1MHz、輻照功率1.0W/cm2、持續(xù)時(shí)間30s、占空比20％。各組分別相應(yīng)處理后繼續(xù)培養(yǎng)24h，應(yīng)用熒光顯微鏡觀察各組細(xì)胞增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（Enhance green fluorescent protein,EGFP）的表達(dá)情況、流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組熒光細(xì)胞比例以此來(lái)評(píng)估基因轉(zhuǎn)染率、逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測(cè)細(xì)胞中PEX mRNA的表達(dá)量、流式

3、細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期的分布。
　?。?）體外培養(yǎng)的鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞按照實(shí)驗(yàn)要求可分為對(duì)照組、微泡組、超聲組、超聲+微泡組、脂質(zhì)體組、超聲+微泡+脂質(zhì)體組。經(jīng)過(guò)相應(yīng)的處理,24 h后應(yīng)用熒光顯微鏡觀察EGFP的表達(dá)、流式細(xì)胞儀檢測(cè)基因轉(zhuǎn)染率。
　　結(jié)果
　?。?）質(zhì)粒+超聲+微泡組：熒光顯微鏡下表達(dá)綠色熒光的細(xì)胞最多，流式細(xì)胞儀檢測(cè)基因轉(zhuǎn)染率最高，逆轉(zhuǎn)錄PCR可見(jiàn)特異性PEX電泳條帶高表達(dá)，流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期分布G0/

4、G1期百分?jǐn)?shù)明顯升高，與其他各組細(xì)胞相比，上述差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05)。
　?。?）熒光顯微鏡下，超聲+微泡+脂質(zhì)體組可見(jiàn)大量 EGFP表達(dá)，明顯多于其他各組；流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染率，超聲+微泡組為(8.59±1.94)%，脂質(zhì)體組為(13.71±2.99)%，明顯高于前者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；超聲+微泡+脂質(zhì)體組為(18.31±2.66)%，明顯高于其他各組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。