一個與磁螺菌MSR-1磁小體合成密切相關(guān)基因編碼蛋白的定位.pdf

1、分類號：學(xué)校代碼：10373密級：學(xué)號：10815071104碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文題目題目：一個與磁螺菌MSR1磁小體合成密切相關(guān)基因編碼蛋白的定位論文作者陳奇指導(dǎo)教師李峰專業(yè)名稱植物學(xué)研究方向應(yīng)用微生物應(yīng)用微生物淮北師范大學(xué)研究生處2011年6月10日I一個與磁螺菌MSR1磁小體合成密切相關(guān)基因編碼蛋白的定位陳奇（植物學(xué)）陳奇（植物學(xué)）摘要：MagospirillumgryphiswaldenseMSR1為趨磁螺菌屬（Magosp

2、irillum）的模式菌株，能夠合成鏈狀排列、具有外膜包被的Fe3O4磁性顆?！判◇w。李峰利用miniTn5lacZ2對磁螺菌MSR1進(jìn)行轉(zhuǎn)座插入突變，獲得磁小體缺失突變株NM21，并通過錨定PCR從NM21中克隆出Tn5插入位點(diǎn)的側(cè)翼序列，獲得長3073bp的DNA片段，此片段由3個F組成，對其中的F1編碼的蛋白進(jìn)行分析，推測它可能位于磁小體膜上，且具有轉(zhuǎn)運(yùn)Fe2的功能，在去除Fe2對細(xì)胞毒害的過程中起著重要作用。為證實(shí)這一推論，本

3、文研究了磁螺菌MSR1中F1編碼蛋白的亞細(xì)胞定位。利用一些生物學(xué)軟件，分析發(fā)現(xiàn)F1讀碼框編碼320個氨基酸，含有5個疏水區(qū)、4個跨膜結(jié)構(gòu)、18個蛋白磷酸化位點(diǎn)、8個α螺旋、3個β折疊、可能位于質(zhì)膜上，這些信息有助于對F1編碼蛋白的研究。以MSR1野生菌株基因組DNA為模板，PCR克隆F1，以pEGFPN1載體為模板，克隆EGFP；以MSR1野生菌株基因組DNA為模板，PCR克隆F1‘，以pEGFPN1載體為模板，克隆EGFP‘，分別插入

4、廣宿主表達(dá)載體pBBR1MCS2，構(gòu)建成融合表達(dá)載體pBBRMSF1EGFP和pBBRMSEGFP‘F1‘，酶切并測序鑒定后分別轉(zhuǎn)入EscherichiacoliS171，將成功轉(zhuǎn)入重組質(zhì)粒的E.coliS171與MSR1接合，篩選接合子并誘導(dǎo)表達(dá)，熒光顯微鏡分析發(fā)現(xiàn)重組蛋白在磁螺菌MSR1中定位于磁小體膜上。同時以MSR1野生菌株基因組DNA為模板，PCR克隆F1‘，將其與載體pET29a連接，構(gòu)建成原核表達(dá)載體pET29aF1‘，酶