室內(nèi)燃煤細(xì)顆粒物對(duì)卵蛋白誘導(dǎo)哮喘大鼠氣道炎癥的作用.pdf

1、目的：通過(guò)觀察室內(nèi)燃煤細(xì)顆粒物(Particulate matter2.5, PM2.5)對(duì)致敏源(Ovalbumin, OVA)誘導(dǎo)哮喘大鼠作用，探討室內(nèi)燃煤PM2.5對(duì)OVA誘導(dǎo)哮喘大鼠的氣道炎性損傷及病理改變。
　　方法：⑴以遵義塊煤為樣，采用濾膜收集室內(nèi)燃煤PM2.5，將采樣后的濾膜置于TFM消解罐中，加入40 ml濃硝酸/濃鹽酸(V/V=1:3)進(jìn)行微波消解。石墨爐原子吸收儀檢測(cè)其鉛(Plumbum, Pb)、鎘(Cad

2、mium, Cd)等元素。⑵將攜帶有室內(nèi)燃煤PM2.5的濾膜進(jìn)行超聲水洗，12層紗布過(guò)濾后真空冷凍干燥。用生理鹽水(Normal saline,NS)配置濃度為15μg/mlOVA和(或)2.5 mg/ml的PM2.5混懸液。將40只6周齡雄性SD大鼠隨機(jī)分為Control、OVA、PM2.5、PM2.5+OVA四組，通過(guò)氣管滴注分別予以NS、OVA(15μg/ml)和(或)PM2.5(2.5 mg/ml)混懸液200μl，2周/次，共

3、4次。末次滴注24小時(shí)后采集支氣管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid, Balf)檢測(cè)炎性細(xì)胞分布,酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay, Elisa)檢測(cè)白介素4(Interleukin4, IL-4)、γ干擾素(Interferonγ, IFN-γ)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(Transforming growth factorβ1, TGF-β1)、IL-8、

4、集落刺激因子(granulocyte macraoprage colony stimulating factor, GM-CSF)。右上肺做HE染色及電鏡切片。Elisa血清檢測(cè)特異性免疫球蛋白IgE(Immunoglobulins E, OVA-IgE)、OVA-IgG1。Real-time Polymerrase chain reaction(RT-PCR)檢測(cè)肺組織Il-4、Ifn-γ基因的表達(dá)。
　　結(jié)果：①室內(nèi)燃煤PM2

5、.5環(huán)境日均濃度為156.95μg/m3，超過(guò)國(guó)家環(huán)境空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的75μg/m3的濃度標(biāo)準(zhǔn)(P=0.004)；元素鋅(Zinc, Zn)含量最高，為34.81μg/m3，最低的是錳(Manganese, Mn)元素0.019μg/m3。②行為觀察PM2.5+OVA組大鼠煩躁不安，抓耳撈腮頻率高，呼吸頻率加深加快，肺部可聞及異常呼吸音。肉眼觀察肺組織Control組色澤、形態(tài)正常；OVA組色澤灰暗，表面粗糙，偶見(jiàn)水腫；PM2.5組肺

6、色澤較灰暗，表面粗糙，偶見(jiàn)水腫， PM2.5+OVA組肺色澤異常，表面粗糙，可見(jiàn)大片白色或半透明病灶，疏松柔軟有彈性，明顯水腫，邊沿缺口狀凹陷明顯。Balf炎性細(xì)胞分布PM2.5+OVA組炎性細(xì)胞較Control組增多(P<0.05),主要以淋巴細(xì)胞(Lymphocyte, Lym)及單核細(xì)胞(Monocyte, Mon)為主。肺支氣管蘇木素-伊紅(Hematoxylin and eosin, HE)染色鏡下見(jiàn)Control組炎性細(xì)胞較

7、少，PM2.5組及OVA組炎性細(xì)胞中等量浸潤(rùn)，PM2.5+OVA組大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。淋巴細(xì)胞Control組較OVA組、PM2.5組、PM2.5+OVA組比較浸潤(rùn)增加；杯狀細(xì)胞PM2.5+OVA組、OVA組較Control組增多(P<0.05)。電鏡下Control組支氣管超微結(jié)構(gòu)未見(jiàn)明顯損傷；OVA組可見(jiàn)有大量即將脫落細(xì)胞，局部可見(jiàn)II型細(xì)胞破損；PM2.5組可見(jiàn)內(nèi)皮細(xì)胞廣泛水腫，肺泡間隔可見(jiàn)大量纖維；PM2.5+OVA組可見(jiàn)炎性細(xì)胞

8、浸潤(rùn)，細(xì)胞器大量破壞，基底膜厚度不均，氣血屏障結(jié)構(gòu)不清晰。Elisa及RT-PCR檢測(cè)表明PM2.5+OVA組IL-4較PM2.5組、OVA組及Control組表達(dá)增加(P<0.05)，IFN-γPM2.5+OVA組、PM2.5組、OVA組較Control組降低(P<0.05)；GM-CSF PM2.5+OVA組較PM2.5組、OVA組、Control組表達(dá)增多(P<0.01)，PM2.5組、OVA組較Control組表達(dá)增多(P<0.

9、05)；IL-8 PM2.5+OVA組較OVA組、Control組表達(dá)增多(P<0.05)， PM2.5組較空白增加(P<0.05)，余組間無(wú)差異；TGF-β1 PM2.5+OVA組、PM2.5組及OVA組與Control組比較降低(P=0.0001)，PM2.5+OVA組與OVA組相比表達(dá)降低(P<0.05)，余組間無(wú)差異。血清中OVA-IgE PM2.5+OVA組與余3組相比升高(P=0.0001)，OVA組與空白、PM2.5組相比