AOPP對MRC-5細(xì)胞增殖及FN、CollagenI表達(dá)的影響.pdf

1、目的：研究晚期氧化蛋白產(chǎn)物（advanced oxidation protein products，AOPP）對人胚肺成纖維細(xì)胞（human embryonic lung fibroblasts MRC-5，MRC-5）活性氧自由基（reactive oxygen species，ROS）及細(xì)胞外基質(zhì)纖維連接蛋白(fibronectin, FN)及I型膠原(collagen I, Col I)的作用。
　　方法：⑴將MRC-5細(xì)胞

2、分為人血清白蛋白(human serum albium, HSA)組，AO-PP時(shí)間效應(yīng)組?0、12、24、48及72小時(shí)和濃度效應(yīng)組0、50、100、200及400μg/ml，NADPH氧化酶抑制劑夾竹桃麻素（apocynin,APO）組（AOPP+APO）。⑵用上述不同濃度的AOPP與MRC-5細(xì)胞共同培養(yǎng)不同的時(shí)間，MTT法檢測細(xì)胞的活力。⑶采用ELISA法檢測FN、ColI及轉(zhuǎn)化生長因子transforming growth f

3、actor-β1，TGF-β1在細(xì)胞上清中的濃度，通過RT-PCR檢測各組細(xì)胞上述3個(gè)指標(biāo)mRNA的表達(dá)。⑷根據(jù)MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果選取AOPP作用最佳的時(shí)間點(diǎn)和濃度點(diǎn)刺激MRC-5細(xì)胞；流式細(xì)胞儀和熒光顯微鏡檢測活性氧自由基ROS的表達(dá)。⑸NADPH氧化酶抑制劑APO與MRC-5細(xì)胞預(yù)孵育1小時(shí)，加入200μg/ml AOPP刺激48小時(shí)，觀察細(xì)胞內(nèi)ROS的變化，從蛋白和基因水平檢測FN、Col I及TGF-β1的表達(dá)。
　　結(jié)果：①

4、不同濃度的AOPP(50、100、200、400μg/ml)作用于MRC-5細(xì)胞12、24、48及72小時(shí)，發(fā)現(xiàn)AOPP對MRC-5細(xì)胞具有顯著的增殖作用(P＜0.05，且在濃度為200μg/ml及時(shí)間48h達(dá)到峰值。②FN、Col I及TGF-β1從蛋白分泌程度和基因表達(dá)水平均上調(diào)(P＜0.05，且在濃度200μg/ml及時(shí)間48h時(shí)達(dá)到峰值；未經(jīng)修飾的人血清白蛋白對上述相關(guān)纖維指標(biāo)的表達(dá)無明顯影響(P＞0.05)。③MRC-5細(xì)胞與

5、200μg/ml AOPP作用48小時(shí)，與對照組相比，細(xì)胞內(nèi)ROS水平顯著升高（P＜0.05）。④MRC-5細(xì)胞與APO預(yù)孵育1小時(shí)，加入200μg/ml AOPP刺激48小時(shí)，細(xì)胞上清中FN、Col I及TGF-β1蛋白分泌減少且mRNA表達(dá)下調(diào)﹙P＜0.05﹚，MRC-5細(xì)胞中ROS水平下降（P＜0.05），未經(jīng)修飾的人血清白蛋白對ROS的表達(dá)無明顯影響﹙P＞0.05﹚。
　　結(jié)論：AOPP能夠促進(jìn)體外MRC-5細(xì)胞的增殖，引