羽扇豆懷特酮的抗炎活性評價與機制研究.pdf

1、異黃酮類物質(zhì)最先由植物中提取出來，由于與雌激素結構類似，因此可以參與機體的代謝，是一種天然化學藥物。目前經(jīng)研究證實了異黃酮類物質(zhì)具有抗炎方面的活性。市面上使用的臨床抗炎藥大多屬于類固醇和環(huán)氧酶抑制劑，但是這類藥物對胃腸道和腎臟存在一定的毒性反應。因此，尋找天然化合物或修飾的天然化合物成為了新的抗炎藥物發(fā)展方向。
　　羽扇豆懷特酮是一種來自于白羽扇豆的異黃酮類物質(zhì)，其抗炎活性及作用機制尚沒有文獻報道。在本課題中，該化合物的抗炎活性及

2、在小鼠巨噬細胞RAW264.7中的作用機制得到初步研究，并在小鼠炎癥模型中進行驗證。本課題使用脂多糖刺激小鼠巨噬細胞 RAW264.7構建炎癥細胞模型，以MTT檢測羽扇豆懷特酮的毒性，首先用ELISA和Griess Kit分別檢測炎癥狀態(tài)下細胞產(chǎn)生的TNF-α和NO，初步鑒定其抗炎活性；其次，進一步的用 PCR檢測其對炎癥因子 COX-2，iNOS，TNF-α，IL-1β和IL-6mRNA的抑制作用；再次，以western blot、免

3、疫熒光來探究羽扇豆懷特酮對巨噬細胞RAW264.7細胞中的NF-κB和MAPKs炎癥應激通路調(diào)節(jié)；最后，以western blot、免疫熒光和轉染來探究羽扇豆懷特酮對Nrf2及其與ARE和下游HO-1的調(diào)節(jié)，從而初步闡明了羽扇豆懷特酮通過抑制了 NF-κB和 MAPKs通路而減緩炎癥，同時促進 Nrf2來增強抗炎能力，并且在小鼠炎癥腫脹模型中也表現(xiàn)出了消腫抗炎的效果。結果發(fā)現(xiàn)：(1)羽扇豆懷特酮可以明顯抑制脂多糖誘導的炎癥因子表達，對N

4、O的半數(shù)抑制濃度為7.7μM，對TNF-α的抑制率為36.1％；(2)羽扇豆懷特酮通過抑制NF-κB上游的 IκBα的磷酸化從而抑制了 NF-κB的核轉移；(3)在脂多糖激活的MAPKs通路中，羽扇豆懷特酮對ERK和JNK抑制程度較強，并對其抑制表現(xiàn)出時間依賴性；(4)羽扇豆懷特酮促進了 Nrf2的核轉移，并且增強了ARE的表達繼而使下游的HO-1表達增加；(5)HO-1抑制劑的加入促進了炎癥因子的釋放，經(jīng)羽扇豆懷特酮處理后其炎癥因子再