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文檔簡介
1、大豆異黃酮廣泛存在于豆科植物中,是亞洲人飲食的重要組成部分。大豆異黃酮具有廣泛的生物活性,如抗癌,抗氧化,抗血栓形成等。羽扇豆懷特酮(Lup)是一種天然異黃酮類化合物,其結(jié)構(gòu)與大豆異黃酮中的活性成分染料木素十分相似。Lup分布于野生植物如甘草、地果,羽扇豆和非洲紫藤樹等。已有的研究顯示,Lup具有抗菌和抗氧化活性,但其抗癌活性和機制還未見報道。本實驗首先以染料木素為母體,通過合成方法得到Lup,進而對其抗癌活性及作用機制進行深入研究。主
2、要的研究工作如下。
化合物L(fēng)up的合成。實驗以染料木素為原料,經(jīng)乙酰化,再通過Mitsunobu反應(yīng)以及克萊森重排反應(yīng),最后水解得到目標化合物L(fēng)up。
利用MTT法,評價Lup對人前列腺癌細胞(DU-145,C4-2,CWR22RN1)、人宮頸癌細胞(Hela)、人乳腺癌細胞(MCF-7)、人鼻咽癌細胞(CNE)、人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)和非洲綠猴腎細胞(Vero)的細胞增殖抑制率。結(jié)果顯示Lup對前列腺癌DU
3、-145細胞的增殖抑制活性最好,其IC50為23.7μM,又用不同濃度的Lup處理DU-145細胞24、48和72 h后,細胞增長緩慢,呈時間劑量依賴性。還通過結(jié)晶紫染色試驗觀察了Lup對DU-145細胞聚集成群落的影響,發(fā)現(xiàn)Lup能有效抑制DU-145細胞的聚集及生長。
研究Lup抑制DU-145細胞增殖的作用機制:不同濃度的Lup處理DU-145細胞,Hoechst33258染色,顯微鏡下觀察DU-145細胞染色質(zhì)皺縮,出
4、現(xiàn)凋亡小體;DAPI染色,流式細胞術(shù)定量分析Lup對DU-145細胞周期的作用,發(fā)現(xiàn)Lup可導(dǎo)致DU-145細胞的細胞周期在S和G2/M期阻滯;Annexin V-FITC/PI熒光雙染流式檢測顯示Lup可誘導(dǎo)DU-145細胞凋亡;Rhodamine123染色膜電位檢測Lup可引起DU-145線粒體膜電位(△Ψm)缺失,且經(jīng)流式分析,線粒體內(nèi)活性氧的表達增加。Western Blot檢測Lup誘導(dǎo)DU-145細胞經(jīng)線粒體途徑凋亡相關(guān)蛋白
5、表達的作用,發(fā)現(xiàn)Lup能上調(diào)Bax,cytochromec,caspase-3,PARP1蛋白的表達,下調(diào)Bcl-2,procaspase-9,p-Akt的表達。
研究Lup抗血管生成的作用,MTT檢測表明Lup對臍靜脈內(nèi)皮細胞HUVEC的增殖有抑制作用,但毒性比之較DU-145細胞要低,其IC50為50.5。細胞劃痕的實驗發(fā)現(xiàn)Lup對HUVEC細胞的遷移有抑制作用;管腔形成實驗顯示Lup能破壞HUVEC細胞形成的管腔結(jié)構(gòu)。通
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