基于高通量測序分析預測羽扇豆醇與miRNA相關的抑癌路徑.pdf

1、三萜類化合物作為一種天然產物已被發(fā)現(xiàn)具有眾多的生物學活性，其中，羽扇豆醇在抗癌方面被證明參與多種信號通路，包括促進腫瘤細胞凋亡、抑制細胞周期、誘導分化、敏化化療抗性、以及抑制腫瘤細胞生成等。有研究表明羽扇豆醇調控miRNA，作為抑制腫瘤通路的前導分子，但其調控途徑尚未明確。本研究以人類宮頸癌細胞為研究對象，采用高通量定量技術從三個層面，miRNA水平、轉錄組表達水平和蛋白組水平，根據(jù)HeLa細胞中miRNA、mRNA、蛋白質表達水平的變

2、化，以熒光定量PCR結果為依據(jù)，探索在羽扇豆醇處理條件下，羽扇豆醇抑制HeLa細胞的分子途徑，為揭示羽扇豆醇抑癌途徑奠定理論與實驗基礎。
　　通過GFOLD和DESeq計算分析，本研究發(fā)現(xiàn)在100μM羽扇豆醇處理12h的條件下，HeLa細胞中有9個顯著上調的miRNA，分別為hsa-miR-1307-3p、hsa-miR-193b-3p、 hsa-miR-140-3p、 hsa-miR-940、 hsa-miR-889-3p、hs

3、a-miR-1307-5p、hsa-miR-1293、hsa-miR-3124-5p、hsa-miR-152-5p，和6個顯著下調的miRNA，包括 hsa-miR-152-3p、hsa-miR-550a-3p、hsa-miR-183-5p、hsa-miR-27a-3p、hsa-miR-182-5p、hsa-miR-99b-3p。以miRNA和相應靶標mRNA調控關系為依據(jù)，根據(jù)Diana-microT-CDS網(wǎng)站搜索和miRanda軟

4、件預測miRNA靶標結果與差異表達轉錄組和蛋白組結合分析，篩選出可以作為研究對象的hsa-miR-183-96-182基因簇和相應的預測靶標KIAA1199和PBX1，用熒光定量PCR手段驗證并檢測篩選出的生物標記性分子在不同時間節(jié)點、不同藥物處理條件下的相對表達水平，證實KIAA1199是hsa-miR-183的靶標，PBX1是hsa-miR-182的靶標，推測hsa-miR-96與hsa-miR-182共同調控PBX1。