椰果中產(chǎn)β-甘露聚糖酶內(nèi)生細菌的篩選及酶學特性研究.pdf

1、刪刪刪jl|l_唧舢』Y3261920——l單位代碼10476I學號14202830091分類號S96河南衙瓢大孝碩士學位論文(專業(yè)學位)椰果中產(chǎn)夕一甘露聚糖酶內(nèi)生細菌的篩選及酶學特性研究專業(yè)學位領(lǐng)域?qū)I(yè)學位類別申請人指導(dǎo)教師：漁業(yè)：農(nóng)業(yè)推廣碩士：穆廣亞：張建新副教授二O一七年五月摘要l|Ill㈣刪㈣㈣lIllI㈣㈣ⅧmIY3261920∥1，4甘露聚糖酶夠一1，4DmaIlllanmannohydr01ase，EC32178)，是一類

2、能水解含∥1，4D甘露糖糖苷鍵的內(nèi)切水解酶，屬于半纖維素酶類。目前已有大量微生物產(chǎn)生伊甘露聚糖酶的相關(guān)報道，不過這些已經(jīng)被報道的菌株大多是從海洋和土壤中分離得到的。自從邱德有等學者從云南紅豆杉中分離出能夠合成抗癌藥物紫杉醇的內(nèi)生真菌后，內(nèi)生細菌的相關(guān)研究持續(xù)升溫，但是主要集中在其藥用價值和拮抗菌的篩選，關(guān)于內(nèi)生細菌產(chǎn)酶的相關(guān)報道相對較少本研究嘗試從海南特色植物椰果中篩選12株高產(chǎn)伊甘露聚糖酶內(nèi)生細菌，并對其酶學性質(zhì)、培養(yǎng)條件進行研究，為

3、應(yīng)用于水產(chǎn)動物飼料奠定理論基礎(chǔ)。本研究共從椰果中分離得到56株植物內(nèi)生細菌。所分離得到的內(nèi)生細菌分布于5個目，5個科，9個屬，19個種。在分離得到的56株菌中，芽孢芽孢桿菌屬(肋cf脅sp)共34株，占總菌株數(shù)的6071％，屬于椰果內(nèi)生細菌中的優(yōu)勢種群，其次是勒克菌屬(厶c彪陽砌sp)共8株，占總菌株數(shù)的1429％，第三是嗜麥芽窄食單胞菌(&P玎Dfr印辦D朋D，z礎(chǔ)sp)共5株，占總菌株數(shù)的893％。對分離的56株菌進行剛果紅初篩和搖

4、瓶發(fā)酵復(fù)篩發(fā)現(xiàn)菌株YZ21酶活最高，可以達到2067U／mL，確定菌株YZ21作為研究對象。經(jīng)過測定胞外與胞內(nèi)酶活比為3797，證明該酶屬于胞外酶。將YZ21的16SrDNA測序結(jié)果通過NCBI進行BLAST，與勘c川駙s甜施凰subspf，2凹村DsD，|甜瓏KCTC13429T相似度為9993％。YZ21的形態(tài)特征、培養(yǎng)特征及生理生化指標測定等表型鑒定結(jié)果與東秀珠等《常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊》和《伯杰氏細菌鑒定手冊》對枯草芽孢桿菌的描述

5、基本符合，結(jié)合YZ21的16SrDNA序列比對的結(jié)果，初步將YZ21菌株鑒定為芽孢桿菌屬細菌(凡ze挖湯口cf刀淞sp)。對菌株YZ21發(fā)酵條件進行優(yōu)化，得出最優(yōu)培養(yǎng)基為2％瓜豆膠、025％蛋白胨、O2％K2HP04、005％MgS04、O5％NaCl。最佳的培養(yǎng)條件為40℃，初始pH值70，200r／min，發(fā)酵72h，接種量為5％。優(yōu)化過后的產(chǎn)酶水平能達到12645U／mL，約為初始酶活的5倍。本研究采用了乙醇沉淀法、硫酸銨鹽析法和