金黃色葡萄球菌生物被膜和纖維蛋白原結(jié)合能力研究.pdf

1、金黃色葡萄球菌是一種重要的人類病原體，可引起各種疾病，從輕則局部皮膚感染到危及生命的全身性感染。金黃色葡萄球菌NCTC8325(RN1及其衍生菌株)被廣泛用來作為一種模式菌株，于1960年從一位敗血癥患者身上分離獲得，在近50年來的研究后，積累了無與倫比的知識財富。本論文針對金黃色葡萄球菌NCTC8325（RN1及衍生菌株）的調(diào)控機(jī)制，研究分為兩個方面，如下所示:
　　1.GbaAB影響PIA依耐型的生物被膜形成
　　革蘭氏

2、陽性菌金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌能夠粘附到生物材料表面，進(jìn)而形成具有抵抗性的生物被膜。確定參與金黃色葡萄球菌粘附和生物被膜形成的生物分子和調(diào)控因子，有助于了解生物被膜相關(guān)的感染。在這研究中，我們確定了新的操縱子，gbaAB(glucose induced biofilm accessory gene)，能夠影響金黃色葡萄球菌NCTC8325生物被膜的形成。實時逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)和Gel shift分析表明，GbaA和GbaB

3、由相同的轉(zhuǎn)錄本所轉(zhuǎn)錄，并且GbaA直接通過自抑制來抑制gbaAB操縱子的轉(zhuǎn)錄。我們的結(jié)果表明，與野生型相比，gbaA突變體增強(qiáng)了生物被膜的形成。然而，gbaB和gbaAB雙突變體減弱了生物被膜的形成，這表明gbaAB操縱子參與生物被膜形成，而gbaB可能是在生物被膜調(diào)節(jié)的關(guān)鍵基因。表型分析表明，gbaAB操縱子介導(dǎo)金黃色葡萄球菌多細(xì)胞聚集階段的生物被膜形成，而不是初始粘附階段的。此外，real-time RT-PCR分析表明，與野生型進(jìn)

4、行比較，在gbaA突變體中icaA被上調(diào)，而在gbaB和gbaAB突變體中icaA被下調(diào)。此外，gbaA和gbaB突變影響葡萄糖誘導(dǎo)的生物被膜形成。我們的研究結(jié)果表明，gbaAB操縱子參與金黃色葡萄球菌多細(xì)胞聚集階段的受葡萄糖誘導(dǎo)的生物被膜形成，而這種調(diào)節(jié)可能是通過ica操縱子來介導(dǎo)的。
　　2.Rot和Agr系統(tǒng)主要通過ClfB來調(diào)控與纖維蛋白原的結(jié)合能力
　　金黃色葡萄球菌成功地作為一種病原體，其部分是由于其粘附到廣泛宿

5、主組織，包括宿主細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，如纖維蛋白原，纖連蛋白和膠原蛋白的能力。金黃色葡萄球菌表達(dá)兩種蛋白可以特異性結(jié)合于纖維蛋白原，聚集因子A和B（ClfA和ClfB）。毒素阻抑子(Rot)被稱為是在金黃色葡萄球菌毒力基因表達(dá)的全局調(diào)控子。Rot的翻譯是由金黃色葡萄球菌附屬基因調(diào)控子(Agr)群體感應(yīng)系統(tǒng)的調(diào)控。在這項研究中，我們證明了Rot和Agr系統(tǒng)能夠在不同的細(xì)菌生長階段，影響細(xì)菌與人纖維蛋白原（Fg）的結(jié)合能力。根據(jù)我們的real-t