1,25(OH)2D3對類風濕關節(jié)炎成纖維滑膜細胞IL-22介導的破骨細胞形成可能機制的研究.pdf

1、背景：類風濕關節(jié)炎（Rheumatoid Arthritis,RA）是一種常見的慢性自身免疫性疾病，主要表現為滑膜炎和不可逆骨破壞。破骨細胞是參與RA關節(jié)破壞的主要細胞，而RANKL的分泌增加是破骨細胞分化的必要條件。1,25(OH)2D3是人體內的活性維生素D，在調節(jié)機體免疫功能、影響骨代謝方面發(fā)揮著重要作用。而RA患者中普遍存在著1,25(OH)2D3的缺乏。RA滑膜表達的IL-22具有促炎和骨質破壞作用，IL-22的可通過JAK-

2、2/STAT-3和p38 MAPK/NF-κB信號通路，促進RANKL的表達，進而影響破骨細胞的形成。我們前期研究發(fā)現1,25(OH)2D3可降低RA中IL-22的水平，并且呈劑量依賴性的下調RANKL的表達。于是我們推測1,25(OH)2D3可能通過阻斷“IL-22→JAK-2/STAT-3和p38 MAPK/NF-κB”信號途徑，抑制RA破骨細胞的形成。
　　目的：⑴研究1,25(OH)2D3在RA中的作用；⑵研究1,25(O

3、H)2D3是否通過阻斷“IL-22→JAK-2/STAT-3和p38 MAPK/NF-κB”信號途徑，抑制RA患者破骨細胞的形成。
　　方法：①回顧性分析1,25(OH)2D3在RA中的作用；②從RA患者的滑膜組織中分離培養(yǎng)FLS至4-6代，從健康志愿者外周血中分離MN（單核細胞），均加入M-CSF（25ng/mL）預處理；3d后，將兩者共培養(yǎng)，同時按分組加入RANKL（30ng/mL），M-CSF（25ng/mL），IL-22（

4、10ng/mL），1,25(OH)2D3（1nM），信號轉導蛋白抑制劑等藥物，分為以下五組：a組：MN+M-CSF+RA-FLS+1,25(OH)2D3+IL-22； b組：MN+M-CSF+RA-FLS+1,25(OH)2D3+I L-22+PD9805（MEK-1通路抑制劑）；c組：MN+M-CSF+RA-FLS+1,25(OH)2D3+I L-22+parthenolid（NF-κB抑制劑）；d組：MN+M-CSF+RA-FLS；

5、e組：MN+M-C SF+RA-FLS+RANKL。在共培養(yǎng)14天后處理，固定玻片上細胞并行TRAP染色，觀察破骨細胞生成的情況；用Real-time PCR檢測所加藥物對破骨細胞表面的標志物TRAP、組織蛋白酶K、基質金屬蛋白酶（MMP）-9 mRNA的表達的影響。③數據分析采用SPSS17.0軟件。
　　結果：⑴RA組血清水平低于健康對照組，差異有統(tǒng)計學意義[(15.67±7.27ng/ml與(20.08±7.14)ng/ml

6、，t=-3.87，P＜0.05]。⑵血清25-羥維生素D水平與BMI、DAS28評分、ESR、CRP呈負相關（r=-0.735、-0.539、-0.343、-0.539，P均＜0.01）；血清25-羥維生素D水平與Ts細胞呈正相關（r=0.636，P＜0.01）。⑶根據病情活動度（DAS28評分）分組后，病情高活動組（DAS28＞5.1）血清25-羥維生素D水平[(13.83±8.42)ng/ml]與ESR[(73.17±31.21)m

7、m/h]呈負相關（r=-0.381,P＜0.01）；血清25-羥維生素D水平[(13.83±8.42)ng/ml]與DAS28評分[(6.80±1.11)mm/h]呈負相關（r=-0.567,P＜0.01）。3組間血清25-羥維生素D水平比較差異有統(tǒng)計學意義（F=132.839，P＜0.01）。⑷根據不同BMI水平分組后，在超重組（BMI≥24 kg/m2），25-羥維生素D水平與ESR呈負相關（r=-0.395, P＜0.05）；在肥

8、胖組（BMI≥28 kg/m2），25-羥維生素D水平與ESR呈負相關（r=-0.385, P＜0.05）。3組間血清25-羥維生素D水平比較差異有統(tǒng)計學意義（F=31.41，P＜0.01）。⑸在抗-CCP陽性組，25-羥維生素D水平與DAS28評分呈負相關（r=-0.464,P＜0.01）?？?CCP陽性組25-羥維生素D水平低于抗CCP陰性組，差異有統(tǒng)計學意義（t=-3.08，P＜0.01）。⑹實驗組中，b組和c組分別加入不同的通路

9、抑制劑。b組與a組相比目的基因表達相對增加，且差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；c組和a組相比目的基因表達相對增加，且差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。⑺對照組中，陽性對照組d組目的基因表達量比陰性對照組e組目的基因表達量相對增加，且差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。⑻在加入通路抑制劑實驗組，b組（加入MEK-1抑制劑PD98059）與c組（加入 NF-κB抑制劑 parthenolide）目的基因相對表達量差異有統(tǒng)計學意義（P<0.0