Robo4及CXCR4基因在成人初發(fā)急性髓系白血病中的表達(dá)及臨床意義分析.pdf

1、目的：檢測(cè)成人初發(fā)急性髓系白血?。╝cute myeloid leukemia，AML）患者Robo4及CXCR4基因的表達(dá)量，并探討其與AML患者臨床實(shí)驗(yàn)室特點(diǎn)、療效及預(yù)后的相關(guān)性，進(jìn)而對(duì)AML患者的預(yù)后評(píng)估和治療提供新思路。
　　方法：⑴收集初發(fā)成人AML患者骨髓標(biāo)本及正常對(duì)照骨髓標(biāo)本。⑵從GeneBank檢索Robo4及CXCR4基因RNA序列，應(yīng)用 primer5.0軟件設(shè)計(jì)引物，經(jīng)BLAST進(jìn)行同源檢索后，引物由上海生工

2、生物公司合成，并對(duì)引物進(jìn)行驗(yàn)證，以β-actin做為內(nèi)參基因，運(yùn)用SYBR Green熒光染料法對(duì)Robo4及CXCR4基因進(jìn)行實(shí)時(shí)定量 PCR分析，使用2-△△CT法計(jì)算 Robo4及 CXCR4基因的相對(duì)表達(dá)量。⑶收集AML患者的性別、年齡、髓外浸潤情況、療效、無復(fù)發(fā)生存（Relapse free survival，RFS）時(shí)間等臨床資料，初診時(shí)外周血細(xì)胞計(jì)數(shù)、乳酸脫氫酶計(jì)數(shù)、骨髓原始細(xì)胞比例、WT1基因表達(dá)水平、細(xì)胞遺傳學(xué)、分子學(xué)

3、突變及融合基因等實(shí)驗(yàn)室結(jié)果，并對(duì)其進(jìn)行分析，做預(yù)后隨訪。⑷根據(jù)Robo4及CXCR4基因的中位表達(dá)水平進(jìn)行分組，采用SPSS-21統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)各組患者之間的臨床實(shí)驗(yàn)室特征、療效及RFS進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果：①共納入75例成人初發(fā)AML患者，其中男性51例，女性24例，中位年齡為43（15-72）歲，其中69例接受了誘導(dǎo)化療，6例患者放棄治療，接受治療的69例患者中40例達(dá)完全緩解（Complete remission，CR），8

4、例達(dá)部分緩解（Partial remission，PR），21例未達(dá)緩解。對(duì)達(dá)到緩解的48例患者進(jìn)行隨訪，其中1例失訪，中位隨訪時(shí)間為8.3（0.5-11.5）個(gè)月，至隨訪截止日期，有19例患者疾病復(fù)發(fā)，中位RFS為6.2個(gè)月。②Robo4基因中位表達(dá)水平在AML患者為37.66（0.005-74502.44），正常對(duì)照者為0.774（0.135-25.36），AML患者Robo4基因表達(dá)水平明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.006）

5、；CXCR4基因中位表達(dá)水平在AML患者中為3.40（0.002-37.40），正常對(duì)照者為0.935（0.241-6.463），AML患者CXCR4基因表達(dá)水平明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.003）。③以Robo4基因的中位表達(dá)量37.66為界限，將AML患者分為高表達(dá)組（38例）和低表達(dá)組（37例），Robo4基因的表達(dá)水平男性明顯高于女性（中位數(shù)分別為135.67和15.73，P=0.004）；Robo4基因高表達(dá)組血紅蛋白

6、濃度明顯高于低表達(dá)組（均數(shù)分別為83.60g/L和72.78g/L，P=0.032）；高表達(dá)組的低?；颊弑壤黠@低于低表達(dá)組（分別為13.16％和32.43%，P=0.046）。④以CXCR4基因的中位表達(dá)量3.40為界限，將AML患者分為高表達(dá)組（38例）和低表達(dá)組（37例），以CXCR4基因作為分類變量進(jìn)行分析，高表達(dá)組中具有不良的染色體核型患者比例為23.68%，明顯高于低表達(dá)組0.0%， P=0.04%；高表達(dá)組的高危患者比例為

7、36.84%，明顯高于低表達(dá)組的13.51%， P=0.043；高表達(dá)組WT1基因中位表達(dá)水平為760.0（7.4-301001.0），明顯低于低表達(dá)組2596.0（0.0-20812.0），P=0.042；高表達(dá)組AML1-ETO融合基因陽性患者的比例為7.89%，明顯低于低表達(dá)組27.02%，P=0.029。當(dāng)CXCR4基因表達(dá)水平作為連續(xù)變量分析時(shí)，髓外浸潤患者的CXCR4基因中位表達(dá)量明顯高于無浸潤組（中位數(shù)分別為10.52和3

8、.54，P=0.021）；染色體核型不良組的CXCR4基因中位表達(dá)量明顯高于預(yù)后中等組和良好組（中位數(shù)分別為7.81、3.54和0.92，P=0.003）；AML1-ETO融合基因陽性組的CXCR4基因表達(dá)水平明顯低于陰性組（中位數(shù)分別為0.92和4.06，P=0.010）。⑤Robo4基因中位表達(dá)水平在CR組為34.78（0.001-5431.0），明顯低于NR組的290.17（3.48-74502.0），P=0.028； CXCR4

9、基因中位表達(dá)水平在CR組為3.06（0.001-37.40），明顯低于NR組的6.94（1.72-24.17），P=0.039。此外，將Robo4和 CXCR4基因表達(dá)水平聯(lián)合分析時(shí)發(fā)現(xiàn)兩者均高表達(dá)組的NR率明顯高于兩者均低表達(dá)組（分別為44.0%和15.0%，P=0.037）。⑥對(duì)47例獲得緩解的患者進(jìn)行了RFS分析，將Robo4和CXCR4基因表達(dá)水平進(jìn)行單獨(dú)分析時(shí)，低表達(dá)組與高表達(dá)組在RFS上并沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；將

10、Robo4和 CXCR4基因表達(dá)水平聯(lián)合分析時(shí)發(fā)現(xiàn)兩者均高表達(dá)組的RFS（預(yù)計(jì)中位RFS為6.0個(gè)月，95%CI4.65-7.34），明顯短于兩者均低表達(dá)組， P=0.030。（由于本研究隨訪時(shí)間較短，至隨訪截至?xí)r間，低表達(dá)組累計(jì)復(fù)發(fā)率未達(dá)到50%，故未得出預(yù)計(jì)中位RFS時(shí)間）。
　　結(jié)論：⑴初發(fā)成人AML患者中Robo4及CXCR4基因表達(dá)水平明顯高于正常人。⑵Robo4基因表達(dá)水平與危險(xiǎn)度分層低危及CR率呈負(fù)相關(guān)，提示Robo