金雀異黃素誘導(dǎo)斑馬魚肝細胞合成VTG的作用機理研究.pdf

1、金雀異黃素(Genistein,4',5,7-三羥基異黃酮)富集于水體和餌料中,能夠顯著促進魚類卵黃原蛋白(VTG)的生成,但其誘導(dǎo)魚類VTG表達的作用機理還不明確。本文以模式生物斑馬魚(Danio rerio)原代培養(yǎng)肝細胞為實驗材料,以特異性拮抗劑阻斷雌激素受體(ERs)或其亞型(ERα或ERβ),研究了雌激素受體在金雀異黃素誘導(dǎo)斑馬魚原代肝細胞vtg-1 mRNA合成中的作用；通過檢測金雀異黃素對斑馬魚原代肝細胞中ERα mRNA

2、和ERβ mRNA表達水平的影響,進一步探討了金雀異黃素是否通過提高ERs的合成來誘導(dǎo)vtg的轉(zhuǎn)錄；并對過氧化物酶體增生物激活受體(PPARs)是否參與金雀異黃素對vtg轉(zhuǎn)錄表達的誘導(dǎo)作用進行了初步的研究。研究結(jié)果如下:
　　 (1)1～1000μmol／L金雀異黃素可劑量性誘導(dǎo)雄性斑馬魚離體肝細胞合成vtg-1 mRNA,其中1000μmol／L的金雀異黃素誘導(dǎo)作用與1μmol／L的17β-雌二醇(E2)接近,證明了金雀異黃素

3、具有弱雌激素活性,約為E2的千分之一。
　　 (2)采用雌激素受體特異性拮抗劑(ICI182780)與1000μmol／L金雀異黃素聯(lián)合暴露雄性斑馬魚原代肝細胞48h后,發(fā)現(xiàn)vtg-1 mRNA的相對表達量顯著下降,金雀異黃素對vtg-1 mRNA的誘導(dǎo)作用被顯著抑制,結(jié)果證實金雀異黃素是通過雌激素受體途徑誘導(dǎo)斑馬魚原代肝細胞產(chǎn)生VTG。
　　 (3)采用ERβ的特異性拮抗劑(美服培酮)與1000μmol／L金雀異黃素聯(lián)

4、合暴露雄性斑馬魚原代肝細胞48 h后,vtg-1 mRNA的表達幾乎完全被抑制。ERα的特異性拮抗劑(雷洛昔芬)與1000μmol／L金雀異黃素聯(lián)合暴露雄性斑馬魚原代肝細胞48 h則對vtg-1 mRNA的轉(zhuǎn)錄有部分抑制作用。結(jié)果表明金雀異黃素主要通過ERβ介導(dǎo)對斑馬魚肝細胞VTG的誘導(dǎo)作用,ERα也部分參與了對VTG合成的介導(dǎo)作用。
　　 (4)進一步研究金雀異黃素對斑馬魚原代肝細胞ERs合成的影響,結(jié)果顯示1000μmol／

5、L金雀異黃素顯著促進了ERα mRNA和ERβ mRNA的轉(zhuǎn)錄,但ERβ的表達量遠高于ERα,約為ERα的1.9倍。說明金雀異黃素可通過誘導(dǎo)ERs的表達來促進VTG的合成,ERβ在其中起主要作用。
　　 (5)過氧化物酶體增生物激活受體(PPARs)是金雀異黃素的另一分子靶點。為了研究PPARs是否參與金雀異黃素對VTG的誘導(dǎo)作用,采用PPARs的特異性拮抗劑進行了研究,結(jié)果顯示斑馬魚原代肝細胞vtg-1 mRNA的表達無顯著變

6、化,初步說明PPARs并不參與金雀異黃素對VTG的誘導(dǎo)作用。
　　 綜上,本文研究表明金雀異黃素具有弱雌激素活性,金雀異黃素可通過雌激素受體途徑直接誘導(dǎo)斑馬魚肝臟細胞產(chǎn)生VTG,其中主要是通過ERβ進行調(diào)節(jié),金雀異黃素還通過誘導(dǎo)ERs表達的升高,促進VTG的合成。PPAR并不參與金雀異黃素對VTG的誘導(dǎo)作用。本文初步探明了金雀異黃素誘導(dǎo)斑馬魚離體肝細胞產(chǎn)生VTG的作用機理,為正確評價植物雌激素對魚類的影響奠定了理論基礎(chǔ)。