金雀異黃素對雄性斑馬魚VTG的誘導及其機理研究.pdf

1、金雀異黃素(Genistein，4’，5，7-三羥基異黃酮)是一種廣泛存在于豆類植物中的異黃酮類植物雌激素，化學結構類似于17β-雌二醇(E2)，是一種潛在的環(huán)境雌激素。目前金雀異黃素以較高濃度廣泛地存在于魚類餌料和環(huán)境水體中，使魚類面臨著食物和水體雙重暴露的威脅。弄清金雀異黃素對魚類的雌激素效應及其作用機理，對于發(fā)展水產養(yǎng)殖、保護漁業(yè)資源有著重要的理論和實際意義。
　　 雄魚及幼魚的卵黃原蛋白(VTG)作為一種公認的檢測環(huán)境雌

2、激素效應的生物標志物，曾被用于金雀異黃素對魚類的雌激素效應的檢測。目前，雖然有研究證實含金雀異黃素的餌料喂養(yǎng)能誘導雄魚及幼魚體內VTG的產生，但對其誘導機理卻尚未進行深入研究。因此，本文驗證了金雀異黃素水體暴露對雄性斑馬魚VTG的誘導效應，并從金雀異黃素影響雌激素受體表達及性激素水平變化的角度，初步研究了其對VTG的誘導機理。
　　 本實驗采用1μg/L、10μg/L、100μg/L、1000μg/L濃度的金雀異黃素對成年雄性斑

3、馬魚進行水體暴露28天，通過real-time PCR技術檢測雄魚肝臟內Vtg1mRNA的表達水平，驗證水體中的金雀異黃素對魚類VTG誘導的雌激素效應；在此基礎上，通過檢測雄性斑馬魚肝臟內ERα mRNA、ERβ mRNA的表達水平，進一步研究了金雀異黃素在體內實驗中對魚類VTG誘導的選擇性雌激素受體介導機制；并利用放射性免疫法檢測了雄性斑馬魚性腺內睪酮和雌二醇水平的變化，探討金雀異黃素是否通過影響性激素水平來實現對VTG的誘導。

4、>　　 本文的研究結果表明：
　　 (1)1μg/L、10μg/L、100μg/L、1000μg/L的金雀異黃素水體暴露成熟雄性斑馬魚28天后，各處理組Vtg1 mRNA的表達水平均上升，10μg/L和100μg/L濃度組出現了顯著上升，高濃度組(1000μg/L)和E2對照組出現了極顯著上升，并具有劑量效應關系，證實了金雀異黃素能夠誘導魚類VTG的產生。
　　 (2)與溶劑對照組相比，金雀異黃素處理組ERα mRNA

5、的表達水平極顯著降低，除低濃度組(1μg/L)外其他濃度組ERβ mRNA的表達水平均出現了極顯著上升；E2處理組兩種ER基因的表達水平均極顯著上升。證實了金雀異黃素對魚類VTG基因的轉錄調節(jié)主要是通過ERβ來介導的，具有ERβ依賴性，推測這可能是金雀異黃素與ERβ的選擇性結合及其結合力的大小所決定的。
　　 (3)除1μg/L和100μg/L濃度組外其他金雀異黃素處理組魚體性腺內睪酮含量極顯著下降，各處理組雌二醇含量均極顯著上