2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、目的: 1.研究金雀異黃素(Genistein,Gen)對(duì)人胃腺癌SGC7901細(xì)胞增殖、遷移以及與人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)粘附的影響,并探討其可能的作用機(jī)制。 2.探討聯(lián)合應(yīng)用腺病毒介導(dǎo)的人TIMP-1和內(nèi)皮抑素(Endostain,End)導(dǎo)入和細(xì)胞移植技術(shù)治療或抑制小鼠黑色素瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的可行性。通過感染表達(dá)人TIMP-1和En

2、d的重組腺病毒的小鼠原代成纖維細(xì)胞,研究原代成纖維細(xì)胞分泌的TIMP-1和End對(duì)小鼠黑色素瘤細(xì)胞遷移和浸潤(rùn)的影響;通過皮下接種感染腺病毒的原代成纖維細(xì)胞制劑,研究其對(duì)小鼠移植瘤的生長(zhǎng)以及腫瘤轉(zhuǎn)移的影響。 方法: 1.分別利用細(xì)胞計(jì)數(shù)和MTT方法檢測(cè)Gen對(duì)SGC7901.細(xì)胞增殖的影響。 2.利用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Gen對(duì)SGC7901細(xì)胞遷移的影響;利用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell細(xì)胞浸潤(rùn)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)感染表達(dá)T

3、IMP-1和End腺病毒后的原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)上清對(duì)小鼠黑色素瘤B16BL6 細(xì)胞遷移和浸潤(rùn)的影響。 3.利用腫瘤細(xì)胞與HuVECs粘附實(shí)驗(yàn)分別研究Gen對(duì)SGC7901細(xì)胞與單層HUVECs粘附的影響,以及感染表達(dá)TIMP-1和End腺病毒后的小鼠原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)上清對(duì)小鼠黑色素瘤B16BL6石細(xì)胞與HUVECs粘附的影響。 4.利用免疫熒光實(shí)驗(yàn)觀察Gen對(duì)SGC7901細(xì)胞中E-cadherin、B-catenin

4、和F-actin分布的影響;利用Western blotting檢測(cè)了Gen對(duì)SGC7901細(xì)胞中FAK、p-FAK、E-cadherin和B-catenin蛋白表達(dá)水平的影響。 5.利用間接ELISA方法分別檢測(cè)感染Ad-End和Ad-TIMP-1的原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)上清中以及原代成纖維細(xì)胞接種小鼠體內(nèi)后的小鼠血清中TIMP-1和End的水平。 6.通過建立小鼠移植瘤模型,導(dǎo)入表達(dá)并分泌TIMP-1和End的原代成纖維

5、細(xì)胞制劑,觀察原代成纖維細(xì)胞分泌的TIMP-1和End對(duì)小鼠黑色素瘤生長(zhǎng)的影響,重點(diǎn)研究聯(lián)合感染Ad-TIMP-1和Ad-End的原代成纖維細(xì)胞制劑對(duì)移植瘤的生長(zhǎng)的影響;利用細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)腫瘤組織病理學(xué)變化。 7.建立小鼠黑色素瘤實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移模型,通過尾靜脈注射B16BL6細(xì)胞,24 h后接種感染腺病毒的原代成纖維細(xì)胞制劑,3周后,處死小鼠觀察肺轉(zhuǎn)移灶或轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)的變化。 結(jié)果: 1.細(xì)胞計(jì)數(shù)和MTT結(jié)果顯示,與

6、對(duì)照組相比,Gcn可以抑制SGC7901細(xì)胞的增殖,以7.5μmol/L對(duì)SGC7901細(xì)胞抑制效果最明顯。 2.細(xì)胞劃痕遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,Gen以劑量依賴的方式抑制SGC7901細(xì)胞的遷移。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell細(xì)胞浸潤(rùn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與Mock組相比,Ad-TIMP-1和Ad-End感染組的細(xì)胞培養(yǎng)上清可以顯著抑制小鼠黑色素瘤B16BL6細(xì)胞的遷移和浸潤(rùn)(P<0.05),尤以Ad-TIMP-1+Ad-End聯(lián)合感染組

7、的細(xì)胞培養(yǎng)上清的抑制作用最為明顯(P<0.01)。 3.腫瘤細(xì)胞與HUVECs粘附實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,Gen低劑量組(2.5μmol/L)不影響SGC7901細(xì)胞與單層HUVECs的粘附(P>0.05),而5.0/μmol/L、7.5μmol/L和10.0μmol/L三個(gè)劑量組與對(duì)照組相比均可以顯著地降低SGC7901細(xì)胞與單層HUVECs的粘附能力(P<0.01)。有趣的是,當(dāng)Gen濃度達(dá)到20.0 μmol/L時(shí),SGC7901細(xì)

8、胞與HUVECs的粘附與對(duì)照組相比又無顯著性差異(P>0.05)。感染腺病毒的原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)上清對(duì)B16BL6細(xì)胞粘附影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與Mock組和Ad-GFP組相比,Ad-TIMP-1組的細(xì)胞培養(yǎng)上清可以顯著抑制B16BL6與單層HUVECs的粘附(P<0.05),而Ad-End組和Ad-TIMP-1+Ad-End組與Mock和Ad-GFP組相比,細(xì)胞培養(yǎng)上清均可以顯著地抑制B16BL6細(xì)胞與HUVECs的粘附(P<0.01)

9、。 4.免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,7.5μmol/L的Gen可以引起SGC7901細(xì)胞中E-cadhcrin、B-catenin和actin重分布。Gen處理的緊密接觸(相對(duì)靜止的)的SGC7901細(xì)胞中應(yīng)力纖維數(shù)目與對(duì)照組相比明顯減少。Western Blotting結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,不同濃度的Gen對(duì)SGC7901細(xì)胞中FAK和B-catenin的表達(dá)沒有明顯影響,但可以下調(diào)細(xì)胞中p-FAK和E-cadherin的表達(dá)。但是,當(dāng)G

10、en的濃度為10.0μmol/L時(shí),E-cadherin表達(dá)量又明顯升高。 5.感染腺病毒的原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)上清的ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示,隨著感染Ad-End和Ad-TIMP-1的成纖維細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng),End和TIMP-1的分泌逐漸增多,證實(shí)Ad-End和Ad-TIMP-1感染小鼠原代成纖維細(xì)胞后,感染細(xì)胞能有效表達(dá)并分泌End和TIMP-1至細(xì)胞培養(yǎng)上清中。在空白對(duì)照組(Mock)和空載腺病毒(Ad-GFP)組小鼠血

11、清中未檢測(cè)出人End和TIMP-1蛋白。感染Ad-End和Ad-TIMP-1的原代成纖維細(xì)胞制劑治療組24 h的小鼠血清中就可檢測(cè)出End和TIMP-1蛋白,并且隨著時(shí)間的推移,小鼠血清中End和TIMP-1一直維持在較高水平,證實(shí)Ad-End和Ad-TIMP-1感染小鼠原代成纖維細(xì)胞后,在小鼠體內(nèi)能有效表達(dá)并分泌TIMP-1和End蛋白。 6.與Mock和Ad-GFP組相比,感染Ad-End、Ad-TIMP-1后的小鼠原代成纖

12、維細(xì)胞制劑治療組可以抑制小鼠黑色素瘤B16BL6細(xì)胞移植痛的生長(zhǎng),尤其是,聯(lián)合感染Ad-End和Ad-TIMP-1的原代成纖維細(xì)胞制劑治療組對(duì)移植瘤的生長(zhǎng)抑制具有明顯的協(xié)同和累加效應(yīng)(P<0.01)。組織病理學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示,感染Ad-End、Ad-TIMP-1后的小鼠原代成纖維細(xì)胞制劑治療組可見大量的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)和明顯的細(xì)胞壞死,尤以聯(lián)合感染Ad-TIMP-1.1+Ad-End細(xì)胞制劑治療組最為明顯。 7.與Mock和Ad-GF

13、P組相比,感染Ad-End、Ad-TIMP-1后的小鼠原代成纖維細(xì)胞制劑治療組可以抑制黑色素瘤B16BL6細(xì)胞實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移,而聯(lián)合感染Ad-TIMP-1和Ad-End的原代成纖維細(xì)胞制劑對(duì)小鼠黑色素瘤實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移的抑制具有明顯的協(xié)同和累加效應(yīng)(P<0.01)。 結(jié)論: 1.Gen抑制SGC7901細(xì)胞的增殖、遷移以及與單層HUVECs粘附可能是通過誘導(dǎo)SGC7901細(xì)胞中E-cadherin、B-catenin和acti

14、n的重排、下調(diào)p-FAK和E-cadherin的表達(dá)等實(shí)現(xiàn)的。 2.感染腺病毒的成纖維細(xì)胞分泌的TMP-1和End可以在體外顯著抑制小鼠黑色素瘤B16BL6細(xì)胞的遷移、浸潤(rùn)以及與HUVECs的粘附。 3.接種感染相應(yīng)腺病毒的原代成纖維細(xì)胞制劑可以表達(dá)并分泌TIMP-1和End到小鼠血清中并能在體內(nèi)維持較高水平,可以顯著抑制小鼠黑色素瘤細(xì)胞移植瘤的生長(zhǎng)和實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移,而且聯(lián)合感染TIMP-1和End的小鼠原代成纖維細(xì)胞制劑

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