EB病毒相關(guān)腫瘤中病毒免疫逃逸基因BNLF2a多態(tài)性研究.pdf

1、目的：EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)又稱人類皰疹病毒4型，世界上有超過90％的健康成人為EBV攜帶者，其感染與人類多種淋巴細胞和上皮細胞性腫瘤有關(guān)。EBV的免疫逃逸可能通過抑制機體對EBV轉(zhuǎn)化細胞的清除，而參與了EBV相關(guān)腫瘤的發(fā)生。BNLF2a是EBV早期基因，可干擾抗原提呈相關(guān)轉(zhuǎn)運蛋白的抗原肽轉(zhuǎn)運而發(fā)揮免疫逃逸作用。研究表明，來自不同地區(qū)的EBV毒株在多種基因位點表現(xiàn)出不同的基因多態(tài)性，同時其相關(guān)腫瘤呈人群

2、和地域傾向性分布，因此是否存在與EBV相關(guān)腫瘤有關(guān)的EBV基因變異一直備受關(guān)注。本研究選擇我國廣東地區(qū)(鼻咽癌高發(fā)區(qū))和山東地區(qū)(鼻咽癌非高發(fā)區(qū))EBV陽性淋巴瘤、胃癌、鼻咽癌和健康人群作為研究對象，對BNLF2a基因的多態(tài)性進行檢測分析，旨在探討B(tài)NLF2a基因的多態(tài)性及其分布特征，為闡明EBV BNLF2a基因變異與EBV相關(guān)腫瘤發(fā)生的關(guān)系提供理論依據(jù)。
　　方法：聚合酶鏈式反應(polymerase chain reacti

3、on，PCR)結(jié)合DNA測序檢測EBV陽性淋巴瘤、胃癌、鼻咽癌和健康人咽漱液標本中BNLF2a基因的多態(tài)性，應用DNAStar軟件對序列進行對比分析，并與EBV標準株B95-8進行比對。根據(jù)測序結(jié)果將各序列進行標準化處理，DNAStar軟件生成系統(tǒng)發(fā)生樹，根據(jù)系統(tǒng)發(fā)生樹和共有突變對各種基因變異進行分類。比較山東和廣東地區(qū)EBV相關(guān)淋巴瘤、胃癌、鼻咽癌和健康人群中BNLF2a各基因型的分布，并與以往文獻發(fā)表的相關(guān)數(shù)據(jù)進行比較和分析。

4、>　　結(jié)果：①共408例標本成功進行PCR擴增及測序，根據(jù)測序結(jié)果及系統(tǒng)發(fā)生樹，所有標本可以分為BNLF2a-A和BNLF2a-B兩種類型。②BNLF2a-A型為主要基因型，見于374例標本，有16例標本發(fā)現(xiàn)新的共有突變(167415nt g→a)。③BNLF2a-B型為次要基因型，見于34例標本，共鑒定出2個共有突變，分別為A8T和R40K。④統(tǒng)計學分析結(jié)果顯示，BNLF2a-A型在廣東地區(qū)咽漱液和EBV相關(guān)腫瘤中的檢出率分別高于山東

5、地區(qū)咽漱液和EBV相關(guān)腫瘤(TW：P＜0.001；EBV相關(guān)腫瘤：P=0.002)。BNLF2a-A型在廣東鼻咽癌中的檢出率顯著高于山東鼻咽癌(P＜0.05)，而在淋巴瘤和胃癌中則兩地區(qū)無顯著性差異。⑤BNLF2a基因型在山東地區(qū)4組人群中的分布有顯著性差異(P＜0.001)，在廣東地區(qū)4組人群中則無顯著性差異。BNLF2a-B型在山東健康人咽漱液中的檢出率顯著高于3種 EBV相關(guān)腫瘤(P＜0.05)，而 BNLF2a基因型分布在山東地