離心運(yùn)動(dòng)對骨骼肌細(xì)胞膜骨架蛋白含量影響的研究.pdf

1、1 研究目的 研究肌細(xì)胞膜骨架蛋白dystrophin在大強(qiáng)度離心運(yùn)動(dòng)及適應(yīng)性訓(xùn)練后的含量變化特點(diǎn)，分析肌細(xì)胞膜骨架蛋白缺失與延遲性骨骼肌損傷時(shí)血清酶升高的關(guān)系，及其對肌細(xì)胞膜部分功能的影響，探討細(xì)胞膜骨架蛋白在骨骼肌纖維中存在的特點(diǎn)和作用。 2 研究方法 以雄性Wistar大鼠為研究對象，進(jìn)行“一次性大強(qiáng)度離心運(yùn)動(dòng)”和“6周適應(yīng)性離心運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練”兩種方式運(yùn)動(dòng)。其中一次性離心運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)為-16°下坡跑臺(tái)跑，

2、定量大負(fù)荷間歇性運(yùn)動(dòng)，跑速為26.8m/min，運(yùn)動(dòng)5min×10組，組間歇1min。適應(yīng)性離心訓(xùn)練為6周，每周5天訓(xùn)練，速度從20.0m/min增加到35.0m/min，每次20min，-5°下坡間歇跑。離心運(yùn)動(dòng)后不同時(shí)段和適應(yīng)性訓(xùn)練后取大鼠后肢腓腸肌外側(cè)頭進(jìn)行分析。 樣本-20℃冷凍切片，15μm厚。“異染性染料-腺苷三磷酸酶法”鑒別肌纖維類型；抗C端單克隆抗體，二步免疫組化法和免疫印跡法檢測Dystrophin含量。地高辛

3、標(biāo)記的寡核苷酸探針原位雜交檢測Dystrophin基因表達(dá)。用Scion Image進(jìn)行組織切片的圖像分析。 酶動(dòng)力法測試血清CK、LDH含量。黃嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法分別用于肌肉勻漿SOD和MDA檢測。測定肌細(xì)胞膜Na+-K+-ATPase活性。以DPH和N[3P]M為探針，用熒光分光光度計(jì)分別測定肌細(xì)胞膜脂質(zhì)流動(dòng)性和膜蛋白的活動(dòng)性。 3 研究結(jié)果 3.1 I型纖維中的dystrophin含量在離心運(yùn)動(dòng)后

4、即刻沒有明顯的變化，在隨后的4小時(shí)和24小時(shí)，有下降的趨勢，在運(yùn)動(dòng)后48小時(shí)和72小時(shí)則明顯減少（P＜0.05）；Iia型纖維中的Dystrophin含量各個(gè)時(shí)相均沒有顯著性的變化；Iib型纖維中的dystrophin含量在離心運(yùn)動(dòng)后即刻就有明顯的下降（P＜0.05）。但在其后的各時(shí)相基本保持穩(wěn)性，不再有明顯的變化。 3.2 離心運(yùn)動(dòng)后即刻dystrophin基因表達(dá)水平明顯下降(P＜0.05)，為安靜組的28％；并在隨后時(shí)相內(nèi)

5、逐漸升高，在48小時(shí)達(dá)到最大，為安靜組的172％。 3.3 進(jìn)行適應(yīng)性訓(xùn)練的大鼠肌細(xì)胞膜骨架蛋白的dystrophin含量有上升的趨勢。大強(qiáng)度定量負(fù)荷后，訓(xùn)練組肌細(xì)胞膜dystrophin含量減少的幅度具有小于對照組的趨勢。 3.4 一次性離心運(yùn)動(dòng)后，膜脂質(zhì)流動(dòng)性逐漸變低，并在運(yùn)動(dòng)后48小時(shí)達(dá)最低。一次性運(yùn)動(dòng)后的膜蛋白活動(dòng)性，則在運(yùn)動(dòng)后逐漸增高，并在12小時(shí)達(dá)最高，24小時(shí)降低后又在48小時(shí)再次升高。適應(yīng)性訓(xùn)練后的膜脂流

6、動(dòng)性，在定量負(fù)荷后，訓(xùn)練組明顯低于其對照組。膜蛋白活動(dòng)性則沒有顯著的組間差異。 3.5未發(fā)現(xiàn)肌細(xì)胞膜骨架蛋白含量的變化與自由基代謝指標(biāo)及血清CK、LDH有明顯的相關(guān)關(guān)系。細(xì)胞膜骨架蛋白dystrophin含量與膜蛋白活動(dòng)性呈負(fù)相關(guān)r=-0.722(P<0.05)。 3.6 適應(yīng)性訓(xùn)練后的離心運(yùn)動(dòng)測試結(jié)果中，血清CK、LDH與膜質(zhì)流動(dòng)性正相關(guān)，其中CK與膜脂質(zhì)流動(dòng)性有具顯著意義的正相關(guān)，r=0.802；與膜蛋白活動(dòng)性具有負(fù)

7、相關(guān)趨勢。同時(shí)膜脂質(zhì)流動(dòng)性與膜蛋白活動(dòng)性有負(fù)相關(guān)的趨勢。在一次性離心運(yùn)動(dòng)測試結(jié)果中，肌細(xì)胞膜上Na+-K+-ATPase活性與脂質(zhì)流動(dòng)性正相關(guān)r=0.518。 4 結(jié)論 4.1 肌細(xì)胞膜骨架蛋白dystrophin在離心運(yùn)動(dòng)的即時(shí)損傷中，以Iib型纖維中的缺失為主，延遲損傷以I型纖維中的缺失為主。 4.2 進(jìn)行適應(yīng)性訓(xùn)練的大鼠肌細(xì)胞膜骨架蛋白dystrophin的含量有上升的趨勢。 4.3 膜骨