軟脈靈對(duì)SHR血管功能及血管平滑肌細(xì)胞骨架蛋白的影響.pdf

1、目的:
　　1.研究軟脈靈對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠(spontaneouslyhypertensiverat,SHR)胸主動(dòng)脈及腸系膜動(dòng)脈血管舒縮功能的影響。
　　2.觀察軟脈靈藥物血清對(duì)血小板源性生長(zhǎng)因子(platelet-derivedgrowthfactor,PDGF)誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞(VascularSmoothMuscleCell,VSMC)骨架蛋白cofilin、twinfilin-1和profilin-1重構(gòu)的影

2、響。
　　方法:
　　第一部分
　　32只12周齡雄性SHR,隨機(jī)分為4組,每組8只:SHR組,軟脈靈大劑量組(high-doseRuanmailing,RH,3ml/kg/d),軟脈靈小劑量(low-doseRuanmailing,RL,1ml/kg/d),氯沙坦組(losartan,LOS,10mg/kg/d)。另設(shè)8只12周齡血壓正常的京都Wistar大鼠(WistarKyotorat,WKY)作為正常對(duì)照組。尾

3、袖法測(cè)定尾動(dòng)脈收縮壓(systolicbloodpressure,SBP)。1.計(jì)算左心室重量與體重比(leftventricularmass/bodyweight,LVM/BW);2.HE染色,計(jì)算腸系膜動(dòng)脈第三級(jí)分支血管壁(中膜)/腔面積比(wall-to-lumenarearatios,W/L)、血管壁厚度/管腔半徑(thicknessofthewalltotheradiusofthelume,Tw/Rl);3.離體血管環(huán)實(shí)驗(yàn)測(cè)血

4、管收縮與舒張功能。收縮或舒張敏感性用pD2值表示,pD2表示EC50(激動(dòng)劑產(chǎn)生其50％最大效應(yīng)的濃度)以10為底的負(fù)對(duì)數(shù)值。
　　第二部分
　　組織塊貼壁法培養(yǎng)VSMC,a-actin單克隆抗體鑒定細(xì)胞;灌胃法制備大白鼠(SpragueDawleyrats,SD)大鼠軟脈靈藥物血清;免疫熒光實(shí)驗(yàn)技術(shù),分別用Dylight488,AlexaFlour633和Cy3標(biāo)記cofilin、twinfilin-1和profilin-

5、1,通過(guò)激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞骨架蛋白變化。
　　結(jié)果:
　　第一部分
　　1.與SHR組比較,RH、RL組治療12周后,SBP均顯著降低(P<0.01)。
　　2.與SHR組比較,RH組LVM/BW顯著降低(P<0.01),小劑量組則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　3.與SHR組比較,RH、RL組均可顯著減低腸系膜動(dòng)脈第三級(jí)分支W/L(P<0.01)。RH組還可明顯降低腸系膜動(dòng)脈第三級(jí)分支Tw/Rl

6、(P<0.01),RL組則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　4.軟脈靈治療對(duì)SHR胸主動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性舒張(Endothelium-dependentRelaxation,EDdR)、內(nèi)皮非依賴性舒張(Endothelium-independentRelaxationEdiR)、血管收縮功能(vasoconstrictivefunction,VCF)的影響
　　1)與WKY組相比,SHR組對(duì)不同濃度乙酰膽堿(acetylch

7、oline,Ach)誘導(dǎo)的胸主動(dòng)脈EDdR明顯減弱,其濃度效應(yīng)曲線明顯右移,pD2值顯著減弱(P<0.01);與SHR組相比,RH、LOS組治療后EDdR顯著改善(P<0.01),RL組EDdR則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P>0.05)。
　　2)硝普鈉(sodiumnitroprusside,SNP)誘導(dǎo)的胸主動(dòng)脈EDiR在WKY組、SHR組、RH組、RL組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)學(xué)差別(P>0.05)。
　　3)去甲腎上腺素(norepinephr

8、ine,NE)誘導(dǎo)的胸主動(dòng)脈VCF在WKY組、SHR組、RH組、RL組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P>0.05)。
　　5.軟脈靈治療對(duì)SHR腸系膜動(dòng)脈EDdR、EdiR、VCF的影響
　　1)與WKY組相比,SHR組對(duì)不同濃度Ach誘導(dǎo)的腸系膜動(dòng)脈EDdR明顯減弱,內(nèi)皮受損顯著,其濃度效應(yīng)曲線明顯右移,pD2值顯著減弱(P<0.01);與SHR組相比,RH組、LOS組治療后EDdR顯著改善(P<0.01),而RL組治療后無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(

9、P>0.05)。
　　2)與WKY組相比,SHR組對(duì)不同濃度SNP誘導(dǎo)的腸系膜動(dòng)脈EDiR明顯減弱,其濃度效應(yīng)曲線明顯右移,pD2值顯著減弱(P<0.01);與SHR組相比,RH組、LOS組治療后EDdR顯著改善(P<0.01),而RL組治療后無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P>0.05)
　　3)與WKY組相比,SHR組對(duì)NE誘導(dǎo)的腸系膜動(dòng)脈收縮(VCF)顯著增強(qiáng)(P<0.01);與SHR組相比,RH組、LOS組治療后收縮顯著減弱(P<0.

10、01),RL組無(wú)明顯差別(P>0.05);與LOS組比較,RH組腸系膜動(dòng)脈收縮功能改善程度有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P<0.05)。
　　第二部分
　　1.軟脈靈藥物血清對(duì)PDGF誘導(dǎo)的VSMC中cofilin和微絲的影響
　　與空白對(duì)照組比較,PDGF刺激后,細(xì)胞呈梭形,細(xì)胞骨架重排,細(xì)胞漿中出現(xiàn)應(yīng)力纖維且排列集中;cofilin表達(dá)增強(qiáng),且和微絲“共位”于胞質(zhì)和板狀偽足處,沿細(xì)胞膜邊緣呈線狀分布。10%軟脈靈藥物血清干預(yù)后,細(xì)

11、胞微絲無(wú)集中排列,應(yīng)力纖維減少且排列松散,板狀偽足減少且只有少量微絲分布;cofilin表達(dá)減弱,且板狀偽足處只有少量cofilin分布。
　　2.軟脈靈藥物血清對(duì)PDGF誘導(dǎo)的VSMC細(xì)胞骨架蛋白cofilin、twinfilin-1和profilin-1的影響
　　與空白對(duì)照組比較,PDGF刺激后,細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形,VSMC板狀偽足明顯增多,cofilin、twinfilin-1和profilin-1這三種肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白的

12、表達(dá)增強(qiáng),在胞內(nèi)重新分布。其中,cofilin、twinfilin-1分布區(qū)域從原來(lái)細(xì)胞核周?chē)陌|(zhì)區(qū)延伸至細(xì)胞運(yùn)動(dòng)前緣的板狀偽足處;profilin-1則在胞核周?chē)陌|(zhì)集中區(qū)表達(dá)增強(qiáng)的基礎(chǔ)上,在細(xì)胞運(yùn)動(dòng)前緣板狀偽足處的表達(dá)也進(jìn)一步增強(qiáng),在整個(gè)細(xì)胞內(nèi)的分布較致密均勻。10%軟脈靈藥物血清干預(yù)后,細(xì)胞變圓,板狀偽足減少,cofilin、twinfilin-1和profilin-1在胞質(zhì)表達(dá)顯著減弱,呈點(diǎn)狀、沙狀或蜂窩狀疏松分布于胞質(zhì)中,

13、部分區(qū)域甚至無(wú)表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　1.軟脈靈可以延緩SHR血壓進(jìn)展。
　　2.軟脈靈可一定程度上改善SHR左心室肥厚和阻力血管重構(gòu)。
　　3.軟脈靈可以改善SHR胸主動(dòng)脈和腸系膜動(dòng)脈的內(nèi)皮功能,并減弱腸系膜動(dòng)脈對(duì)縮血管物質(zhì)的收縮反應(yīng)。
　　4.PDGF可增強(qiáng)血管平滑肌細(xì)胞骨架蛋白cofilin、twinfilin-1和profilin-1的表達(dá)。
　　5.軟脈靈除了減少應(yīng)力纖維和板狀偽足的形成,還