大負荷運動及恢復(fù)期間大鼠骨骼肌骨架蛋白Nebulin和Vimentin及超微結(jié)構(gòu)的變化.pdf

1、目的：研究大負荷運動及恢復(fù)期大鼠骨骼肌骨架蛋白Nebulin及Vimentin及超微結(jié)構(gòu)的變化。
　　 方法：以36只6周齡健康雄性SD大鼠為研究對象。將其隨機分為6組，每組6只：A，安靜對照組(Control)；B，力竭運動即刻組(E0)；C，力竭運動后12h組(E12)；D，力竭運動后24h組(E24)；E，力竭運動后48h組(E48)；F，力竭運動后72h組(E72)。各力竭運動組進行為期一周的負重力竭性游泳運動，并于末次

2、力竭運動后的不同時間點宰殺取樣。所有大鼠用烏拉坦腹腔麻醉、宰殺后迅速取腓腸肌、比目魚肌、股外側(cè)肌、股直肌，部分液氮冷凍保存待用，另一部分分別用4％多聚甲醛或2.5％戊二醛固定。采用SABC-DAB免疫組化方法檢測大鼠比目魚肌和股外側(cè)肌中骨架蛋白Nebulin和Vimentin蛋白表達，并用圖像分析儀對免疫染色切片進行定量分析。取股直肌樣本制作電鏡超薄切片，透射電子顯微鏡下觀察骨骼肌的超微結(jié)構(gòu)變化。
　　 結(jié)果：
　　 (

3、1)免疫組化結(jié)果顯示，大負荷運動后，E0組股外側(cè)肌vimentin和nebulin染色程度明顯加深，而且陽性范圍明顯增大，不僅分布于胞漿中，還分布于細胞周圍的結(jié)締組織，以及小血管的周圍及內(nèi)部；運動后E12組，vimentin和nebulin表達強度明顯低于運動后即刻組(P＜0.05)，但仍明顯高于對照組；運動后E24組的染色范圍更大，但染色程度比運動后即刻和運動后12組稍淺。E48組染色范圍和運動后E24組范圍相近，胞漿，細胞周圍以有小

4、血管分布處都有表達，尤其在個別壞死細胞處整個細胞區(qū)域都有表達，表達程度比前面幾組都要淺。運動后E72組陽性范圍明顯增大，染色逐漸減淡。比目魚肌的結(jié)果與股外側(cè)肌相似。
　　 (2)大鼠股外側(cè)肌、比目魚肌免疫組化結(jié)果均顯示，vimentin和nebulin圖像分析系統(tǒng)統(tǒng)計結(jié)果基本相似。對照組無論是平均光密度值還是陽性目標面積都較少。E0組大鼠骨骼肌vimentin和nebulin表達的平均光密度值最高，說明此時表達信號最強；E12組

5、表達強度明顯低于運動后E0組(P＜0.05)，但仍明顯高于C組(P＜0.05)；運動后24、48組表達強度低于運動后12組，但差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義，E72組顯色最淡。
　　 另外，運動后所有時相的vimentin和nebulin陽性面積百分比PSA都明顯高于對照組。E24組大鼠骨骼肌中PSA最高。從各組平均光密度值和陽性面積來看，E0組平均光密度最大，以后逐漸減少。而陽性表達面積從運動后即刻開始逐漸遞增，E24、E48組的陽性表達

6、面積較大，PSA最高值在E24組，表明運動后不同時間點vimentin和nebulin的表達都有不同程度的增加。
　　 (3)通過觀察安靜對照組和E0組、E24組股直肌電鏡照片發(fā)現(xiàn)，對照組的骨骼肌呈正常的超微結(jié)構(gòu)，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及線粒體均清晰可見，細胞核呈正常結(jié)構(gòu)，肌原纖維排列整齊規(guī)則，H帶、I帶、M線及Z線界限清晰，基質(zhì)內(nèi)有少許空泡。力竭運動組(E0、E24)骨骼肌結(jié)構(gòu)明顯遭受破壞，具體表現(xiàn)細胞間質(zhì)水腫、肌間隙增寬，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體可見

7、有輕度變形，細胞核及核膜保存尚好；肌原纖維疏松變細，H帶、I帶界限不清，M線、Z線模糊，出現(xiàn)Z線扭曲、消失，部分基質(zhì)變淺，力竭運動組可明顯看出線粒體變形、扭曲、腫大。
　　 結(jié)論：
　　 (1)大負荷運動后大鼠骨骼肌肌纖維免疫組化結(jié)果顯示，Nebulin和Vimentin染色程度及陽性范圍均不同程度、不同范圍地出現(xiàn)了增加，在運動后即刻達峰值，表明細胞骨架蛋白nebulin和vimentin是骨骼肌運動性微損傷的敏感形態(tài)學(xué)

8、指標.
　　 (2)vimemin和nebulin免疫組化圖像分析系統(tǒng)統(tǒng)計結(jié)果，二者基本相似。與對照組相比，力竭運動后Nebulin和Vimentin平均光密度及陽性面積百分比均顯著升高，平均光密度在力竭后即刻較高，但陽性面積百分比最高點出現(xiàn)在運動后24小時。表明運動后不同時間點vimentin和nebulin的表達都有不同程度的增加。
　　 (3)大鼠股直肌電鏡下觀察結(jié)果顯示，一周大負荷游泳運動能夠引起骨骼肌超微結(jié)構(gòu)較