八氫番茄紅素脫氫酶活性測定體系的相關(guān)研究.pdf

1、南開大學(xué)碩士學(xué)位論文八氫番茄紅素脫氫酶活性測定體系的相關(guān)研究姓名：戎清清申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：植物學(xué)指導(dǎo)教師：朱曄榮；王勇2012-05A b s t r a c tA b s t r a c tC a r o t e n o i d sp l a y a v i t a lr o l ei np h o t o s y n t h e s i s ，g r o w t h a n d d e v e l o p m e n to f

2、 p l a n t ．T h e r e a r e t w o i m p o r t a n tc o l o r l e s s c a r o t e n o i d s i nt h e c a r o t e n o i db i o s y n t h e t i cp a t h w a y ：p h y t o e n ea n d p h y t o f l u e n e ，w h i c ha r es u b

3、 s t r a t e so f p h y t o e n ed e s a t u r a s e ( P D S ) ．P D Si s t h et a r g e to f a m i d e h e r b i c i d e s ．I nr e c e n ty e a r s ，m a n yc o m p o u n d s t h a tm a y i n h i b i tt h ea c t i v i t y

4、o f P D Sh a v e b e e ns y n t h e s i z e d ．I nt h i ss t u d y , t w op r o k a r y o t i ce x p r e s s i o ns t r a i n sh a v e b e e n u s e df o rs y n t h e s i z i n gp h y t o e n ea n d e x p r e s s i n gp

5、h y t o e n e d e s a t u r a s e ，r e s p e c t i v e l y , t ot e s tt h eP D S e n z y m a t i c a c t i v i t y ．W eh a v et r i e dt oe s t a b l i s h a s t a b l e ，f a s ta n de f f i c i e n th i g h - t h r o u

6、 g h p u ts c r e e n i n gs y s t e mf o rs e l e c t i n g n e w c o m p o u n d s b ya n a l y z i n g i t si n h i b i t i o nt oP D S e n z y m a t i ca c t i v i t y ．I nt h i s s t u d y , H P L Ca n a l y s i sc

7、o n d i t i o n sw e r eo p t i m i z e d ．W ef o u n dt h a t 10 0 ％e t h a n o l a sm o b i l ep h a s eW a sb e t t e rt h a n m e t h a n o lw h e n u s i n gaC 18c o l u m na n dr u n n i n g a tr o o mt e m p e r a

8、 t u r ea n dlm L ／m i nf l o wr a t e ．T h ed e t e c t i o nw a v e l e n g t hw a s2 8 6 n m ．B e s i d e s ，t h ei n f l u e n c eo f l i g h t t o p h y t o e n el o s sw a sa s s a y e d ，a n dt h er e s u l ts h o

9、 w e d t h a t i n c a n d e s c e n t l i g h t c a u s e d m o r eo x i d a t i v e d e g r a d a t i o nt o p h y t o e n ec o m p a r e dt o t h a t o fn a t u r a l l i g h t ．M e a n w h i l e ．t h r e eEc o l ip r

10、 o k a r y o t i ce x p r e s s i o ns t r a i n s ：E ．c o l iB L 2 1 ( D E 3 ) p L y s S , E ．c o l iR o s e t t a T M 2 ( D E 3 ) p L y s S a n d E ．c o l iJ M l 0 9h a v eb e e n u t i l i z e d t o e x p r e s sP D S

11、 p r o t e i n ．T h e e x p r e s s i o n o fs o l u b l e P D SW a sa n a l y z e di nEc o l iR o s e t t a T M 2 ( D E 3 ) p L y s S , f o rw h i c h t h ec u l t u r e t i m e ，t e m p e r a t u r ea n d t h ec o n c

12、e r t r a t i o na n d i n d u c t i o nt i m e o f I P T G w e r ec h a n g e d ．T h er e s u l t ss h o w e dt h a tt h el e v e lo f P D S e x p r e s s i o nW a sh i g h e rw h e nO D 6 0 0 W a sb e t w e e n0 ．6 a n

13、 d0 ．8 ，I P T Gc o n c e n t r a t i o nw a slm m o l ／L ，a n de x p r e s s i o nt i m ew a s4 h - 5 h ．T h ee f f e c t s o fd i f f e r e n tb a c t e r i a ll y s i sm e t h o d sa n ds o m e s u b s t a n c e sa d d

14、 e d t ot h ee x p r e s s i o n s y s t e mw e r ea l s os t u d i e d i nE c o i lR o s e t t a T M 2 ( D E 3 ) p L y s S ．T w o k i n d s o f a c t i v i t yd e t e r m i n a t i o ns y s t e m s w e r e e s t a b l i

15、 s h e d ：i nv i t r oe n z y m a t i ca c t i v i t ya s s a ya n d i nv i v oe n z y m a t i c a c t i v i t ya s s a y ．I I lt e r m so f t h ei n v i t r o a s s a y , w e砸e dt h r e eP D S f r o md i f f e r e n te

16、x p r e s s i o n s t r a n s ．T oe s t a b l i s h 8 1 1i nv i v oa s s a y , w e g o ta t r a n s f o r m a n tw h i c h c o n t a i n e d b o t h t h ep A C C p l a s m i d ( p r o d u c i n g p h y t o e n e ) a n dt