鎂離子螯合酶D亞基互作蛋白P43功能研究.pdf

1、葉綠素是植物進(jìn)行光合作用的主要色素分子，也是植物中最豐富的四吡咯化合物。鎂離子螯合酶是葉綠素合成分支途徑的第一個酶，也是關(guān)鍵酶，它能催化鎂離子螯合到原卟啉Ⅸ中形成鎂原卟啉Ⅸ。鎂離子螯合酶是由I、D和H(CHLI、CHLD和CHLH)三個亞基組成的異源聚合酶。
　　 鎂離子螯合酶各亞基除參與催化鎂離子的螯合外，還參與其它的生物學(xué)功能，且能夠與其它蛋白發(fā)生相互作用，如H亞基是SigE的反式作用因子，并且能夠與鎂原卟啉Ⅸ甲基轉(zhuǎn)移酶發(fā)生

2、相互作用等。
　　 本研究主要圍繞鎂離子螯合酶D亞基的互作候選蛋白——DNA復(fù)制輔助蛋白P43展開，主要包括兩方面:
　　 一方面，利用酵母雙雜交技術(shù)、GST-Pulldown技術(shù)、雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)、免疫共沉淀等分別從體內(nèi)、體外驗(yàn)證了P43與鎂離子螯合酶CHLD的互作關(guān)系，說明葉綠素合成途徑與DNA復(fù)制之間可能存在生物學(xué)聯(lián)系。
　　 另一方面，利用VIGS技術(shù)、酵母雙雜交系統(tǒng)分析、Westernblot分析等對

3、P43的生物學(xué)功能進(jìn)行了探討。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在煙草和擬南芥中可能存在著P43的同源蛋白。通過小量篩選酵母雙雜交文庫，得到了兩個P43的互作候選蛋白，利用VIGS技術(shù)得到了鎂離子螯合酶CHLI、CHLD的抑制植株，對其進(jìn)行Westernblot分析，結(jié)果顯示抑制植株中P43的含量并無明顯變化，說明了鎂離子螯合酶CHLD雖然能與P43發(fā)生相互作用，但CHLD的缺失并不會造成P43蛋白含量的明顯改變。RNA結(jié)合試驗(yàn)顯示P43可能結(jié)合RNA，并具