水稻鎂離子螯合酶調(diào)控蛋白GUN4羧基末端的功能研究.pdf

1、在高等植物中，有四類(lèi)四吡咯化合物，它們分別是:葉綠素(Chl)、血紅素(Heme)、原血紅素(Siroheme)、光敏色素(Phytochromobilin)，它們?cè)谥参锏暮芏嗌顒?dòng)中起著重要的作用。葉綠素是植物體內(nèi)含量最豐富的四吡咯化合物，它對(duì)綠色植物的生長(zhǎng)發(fā)育是必不可少的。葉綠素生物合成途徑（鎂分支）中的第一個(gè)酶是鎂離子螯合酶，在依賴ATP的條件下催化將Mg2+插入原卟啉Ⅸ形成鎂原卟啉Ⅸ，它由I亞基、D亞基、H亞基組成，這些亞基除

2、了形成復(fù)合物來(lái)行使鎂離子螯合酶功能以外，還參與其他的代謝途徑。GUN4蛋白是一個(gè)卟啉結(jié)合蛋白，它能提高植物鎂離子螯合酶的活性，我們以前的研究發(fā)現(xiàn)GUN4羧基末端的幾個(gè)氨基酸具有重要作用，而且這些氨基酸序列在高等植物中是保守的，而在藍(lán)細(xì)菌中是不存在的，說(shuō)明高等植物GUN4蛋白可能有著特殊的調(diào)節(jié)方式。
　　本課題著重于水稻GUN4與鎂離子螯合酶H亞基的體外互作研究以及鎂離子螯合酶活性的分析，主要包括以下兩個(gè)方面:
　　首先我們采

3、用缺失突變獲得了缺失羧基末端8個(gè)氨基酸的GUN4L，通過(guò)酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)、GST Pull-down實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證了GUN4L與鎂離子螯合酶的H亞基相互作用，說(shuō)明OsGUN4在缺失羧基末端氨基酸后與H亞基的結(jié)合沒(méi)有受到影響。
　　其次我們?cè)隗w外表達(dá)并且純化OsGUN4與OsGUN4L，分析它對(duì)鎂離子螯合酶活性的影響，我們發(fā)現(xiàn)GUN4L對(duì)鎂離子螯合酶失去了激活作用。
　　綜上所述，OsGUN4的羧基末端氨基酸缺失不會(huì)影響它與亞基的結(jié)