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文檔簡介
1、微生物胞外多糖廣泛應用于食品、醫(yī)藥、石油、日用輕工等多個領域,越來越引起人們的關注。目前,世界上微生物多糖產(chǎn)量增長率約為10%,一些新型多糖的年增長率可達30%以上,其中細菌多糖占有很大的份額。本文從采集的樣品中篩選出胞外多糖產(chǎn)量較高的菌株W4-3,對其進行研究,主要內(nèi)容有菌株的篩選鑒定、發(fā)酵產(chǎn)糖培養(yǎng)基成分和培養(yǎng)條件的優(yōu)化、多糖的提取純化及其理化性質(zhì)的研究,主要結果如下:
從采集到的樣品中分離篩選可產(chǎn)胞外多糖的細菌,經(jīng)過平
2、板鑒別初篩共篩選出可產(chǎn)胞外多糖的菌株15株,經(jīng)過搖瓶發(fā)酵復篩篩選出多糖產(chǎn)量明顯高于其他菌株的W4-3菌株。經(jīng)過對W4-3菌株的初步鑒定及16SrDNA序列的測定,鑒定該菌株為鞘氨醇單胞菌,將其16SrDNA序列進行同源性比對構建了其16SrDNA系統(tǒng)發(fā)育樹。
用細菌W4-3進行發(fā)酵產(chǎn)糖,在搖瓶條件下首先通過單因素實驗研究培養(yǎng)基中碳源、碳源濃度、氮源、碳氮比和無機鹽離子(KH2PO4和MgSO4)這些基本組成成份對其產(chǎn)糖影響
3、并進行分析,在此基礎上通過響應面法確定其發(fā)酵產(chǎn)糖的最佳培養(yǎng)基基本組成成分:最佳碳源為蔗糖,濃度為40 g/L,最佳氮源為酵母膏,最佳碳氮質(zhì)量比為10,最佳KH2PO4濃度為1.0 g/L、Mg SO4濃度為0.80 g/L,以此條件進行實驗,多糖產(chǎn)量可達7.158 g/L,與理論預測值7.235 g/L接近,回歸分析和驗證實驗表明了該響應面法的合理和可行性。之后通過單因素實驗確定W4-3細菌發(fā)酵產(chǎn)糖其他工藝條件,最佳裝液量為30 mL/
4、250 mL,最佳初始發(fā)酵液pH為7。
發(fā)酵產(chǎn)糖結束后的發(fā)酵液經(jīng)除菌、醇沉、Sevage法脫蛋白、透析濃縮后,冷凍干燥得多糖粉末。通過單因素和正交實驗確定乙醇提取多糖的最佳工藝條件為:乙醇終濃度75%,提取溫度為4℃,提取時間為20 h。對多糖溶液進行紫外光譜掃描,結果表明該多糖不含蛋白質(zhì)和核酸。對多糖進行DEAE-52柱層析分離,結果表明該多糖樣品中基本不含中性多糖,主要由鹽洗脫下的酸性多糖組成。通過對多糖的紅外光譜圖分
5、析可知該細菌所產(chǎn)多糖在3500-3000cm-1、3000-2800 cm-1、1400-1200 cm-1、1000-1100 cm-1處均有多糖的典型特征吸收峰,多糖為β-D-葡萄吡喃糖苷鍵型,不含甘露糖。
精制多糖粉末為乳白色,不溶于丙酮、95%乙醇和無水乙醚,較難溶于室溫下的蒸餾水中,較易溶解于沸蒸餾水及1M HCl中,很容易溶解于1M NaOH中。該多糖具有多糖類的基本顏色反應,是非淀粉多糖,含有糖醛酸。對多糖粘
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