基于組織芯片篩選多種相關(guān)蛋白建立卵巢漿液性癌的分子分型.pdf

1、研究背景：
　　組織病理學(xué)診斷是腫瘤診斷的金標(biāo)準(zhǔn)和臨床治療的基礎(chǔ)，但對(duì)病理分級(jí)與手術(shù)病理分期相同的卵巢漿液性癌患者采取同樣的治療方案，他們的治療反應(yīng)以及預(yù)后卻有著明顯的不同，究其原因是卵巢漿液性癌在分子水平上存在高度個(gè)體異質(zhì)性?；诜肿赢愘|(zhì)性的個(gè)體化診療是婦科腫瘤治療的新方向，而分子分型是實(shí)現(xiàn)個(gè)體化診療的基礎(chǔ)。本研究目的是通過(guò)多蛋白篩選初步構(gòu)建卵巢漿液性癌預(yù)后以及鉑類敏感性分子分型。
　　研究方法：
　　1.構(gòu)建臨床病

2、理數(shù)據(jù)庫(kù)以及制作組織微陣列
　　納入2000年初至2009年底10年間在北京協(xié)和醫(yī)院婦產(chǎn)科完成初次腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)和鉑類術(shù)后化療并留有初次手術(shù)病理標(biāo)本的晚期卵巢漿液性癌患者，共計(jì)122例，嚴(yán)密隨訪截止至2012年12月31日。由兩位病理科醫(yī)師確認(rèn)原發(fā)癌灶（癌灶直徑≥3mm）并標(biāo)記，鏡下觀察癌組織無(wú)明顯鈣化及壞死，制作卵巢漿液性癌癌灶組織微陣列（組織芯片）蠟塊并切片，選取高質(zhì)量組織芯片備后續(xù)試驗(yàn)使用。
　　2.免疫組織化學(xué)染色以

3、及顯微圖像采集分析
　　選取21個(gè)蛋白進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，嚴(yán)格固定同一批次組織芯片免疫組織化學(xué)染色以及顯微圖像采集的各項(xiàng)物理、化學(xué)、時(shí)間、硬件及軟件參數(shù)，確保同一批次芯片每一個(gè)芯片點(diǎn)接受同樣的試驗(yàn)操作。對(duì)采集的圖像進(jìn)行灰度分析，獲取平均光密度值，修正后，根據(jù)平均光密度值大小轉(zhuǎn)化為表達(dá)強(qiáng)度分級(jí)（無(wú)/微量表達(dá)、低表達(dá)、中表達(dá)和高表達(dá)）。
　　3.分子分型統(tǒng)計(jì)模型構(gòu)建以及臨床應(yīng)用轉(zhuǎn)化
　　以3年為界，將0S＜3年定義為預(yù)后

4、差，0S≥3年定義為預(yù)后好;以1年為界，將DFS/PFS＜1年定義為鉑類不敏感，DFS/PFS≥1年定義為鉑類敏感。采用Pearson卡方和Spearmann等級(jí)相關(guān)對(duì)蛋白表達(dá)強(qiáng)度和預(yù)后指標(biāo)及鉑類敏感性指標(biāo)進(jìn)行交叉分析，P值＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，將P值＜0.05的蛋白納入下一步建模擬合范圍。對(duì)進(jìn)入建模擬合范圍的蛋白，采用Logistic回歸建模，SCORE檢驗(yàn)選入，似然比檢驗(yàn)篩除，逐步回歸，得到預(yù)測(cè)預(yù)后以及化療敏感性準(zhǔn)確率最

5、高的分子分型。
　　研究結(jié)果：
　　1.初步建立卵巢漿液性癌預(yù)后分子分型
　　聯(lián)合檢測(cè)Pim-1、HER-2和WT-1對(duì)預(yù)測(cè)預(yù)后總準(zhǔn)確率最高，較單測(cè)Pim-1總的預(yù)測(cè)準(zhǔn)確效率由77.9％提高至82.8％，其中對(duì)預(yù)后差的預(yù)測(cè)準(zhǔn)確率由62.3％提高為69.8％，對(duì)預(yù)后好的預(yù)測(cè)準(zhǔn)確率由89.9％提高為92.8％。移去模型中任一蛋白，對(duì)于預(yù)測(cè)效果均會(huì)帶來(lái)顯著改變。
　　2.初步建立卵巢漿液性癌鉑類化療敏感性分子分型

6、>　　聯(lián)合檢測(cè)HER-2、P-gp和Survivin對(duì)預(yù)測(cè)鉑類敏感性總準(zhǔn)確率最高，較單測(cè)HER-2總的預(yù)測(cè)準(zhǔn)確率由66.7％提高至70.4％，其中對(duì)預(yù)后差的預(yù)測(cè)準(zhǔn)確率由39.6％提高為62.5％，但對(duì)預(yù)后好的預(yù)測(cè)準(zhǔn)確率由88.3％降至為72.7％。移去模型中任一蛋白，對(duì)于預(yù)測(cè)效果均會(huì)帶來(lái)顯著改變。
　　3.把分子分型統(tǒng)計(jì)模型轉(zhuǎn)化為臨床應(yīng)用
　　把Pim-1、HER-2、WT-1、P-gp和Survivin的弱表達(dá)定義為0分，

7、強(qiáng)表達(dá)定義為1分，3者相加即為預(yù)后分子分型（Pim-1、HER-2和WT-1）或鉑類敏感性分子分型（HER-2、P-gp和Survivin）的分值，分子分型得分為0分至3分，0分與1分提示預(yù)后好或者鉑類敏感，2分或者3分提示預(yù)后差或者鉑類不敏感，
　　結(jié)論：
　　1.聯(lián)合檢測(cè)Pim-1、HER-2和WT-1可以更準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)患者的預(yù)后;
　　2.聯(lián)合檢測(cè)HER-2、P-gp和Survivin可以更準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)患者的鉑類化療