明月草內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物活性及與植物生長關(guān)系的研究.pdf

1、明月草在民間被稱為“神仙草”，有降血糖、降血壓和降血脂等作用，具有很高的藥用研究價(jià)值。內(nèi)生真菌能產(chǎn)生與宿主植物相同或相似的化學(xué)成分，近年來成為新藥來源的研究熱點(diǎn)。目前尚未見明月草內(nèi)生真菌方面的研究報(bào)道，鑒于此本實(shí)驗(yàn)選用明月草為植物材料，研究其內(nèi)生真菌及其發(fā)酵產(chǎn)物的生物活性，同時(shí)對(duì)明月草內(nèi)生真菌與明月草植物的生長關(guān)系進(jìn)行了探究。
　　采用組織塊分離法從明月草中共分離得到39株內(nèi)生真菌，從根中得到10株，莖中得到15株，葉中得到14株

2、，對(duì)其中14株內(nèi)生真菌進(jìn)行形態(tài)鑒定。結(jié)果表明：它們分別屬于鐮刀菌屬Fusarium（5株），鏈格孢屬Alternaria（1株），青霉屬Penicillium（1株），根霉屬Rhizopus（1株），曲霉屬Aspergillus（3株），頭孢霉屬Cephalosporium（3株）。
　　對(duì)39株內(nèi)生真菌的發(fā)酵液分別用乙酸乙酯和正丁醇進(jìn)行萃取，菌絲體用甲醇提取，共得到117個(gè)樣品。進(jìn)行抗氧化、抑菌和抑制α-糖苷酶活性的研究。

3、>　　抗氧化實(shí)驗(yàn)分別采用鐵氰化鉀還原法、水楊酸法等方法。結(jié)果表明：樣品中維生素C相當(dāng)含量（VC當(dāng)量）超過300μg/mg的有7個(gè)，其中R-12的乙酸乙酯部位達(dá)到959.37μg/mg，且總還原力的EC50低于VC；13個(gè)樣品的DPPH自由基清除率大于80％；羥自由基清除率普遍較低；內(nèi)生真菌 R-4的3個(gè)部位的抗氧化活性整體較好。（樣品濃度均為0.1 mg/mL）
　　抑菌實(shí)驗(yàn)采用濾紙片法。結(jié)果表明：有4個(gè)樣品對(duì)6種指示菌都有抑制效

4、果；14個(gè)樣品對(duì)其中5種測試菌有抑制效果。L-4的甲醇部位對(duì)肺炎克雷伯菌、綠膿桿菌和乳鏈球菌的抑菌圈直徑分別達(dá)到18 mm、21.7 mm和17.3 mm，L-7的乙酸乙酯部位對(duì)地衣芽孢桿菌抑菌圈直徑為18.3 mm；效果均好于10 U硫酸鏈霉素或16 U的青霉素。（樣品濃度均為10 mg/mL）
　　抑制α-糖苷酶活性實(shí)驗(yàn)采用改良后的PNPG法。結(jié)果表明：117個(gè)樣品中對(duì)α-糖苷酶有抑制作用的樣品有78個(gè)，占總樣品數(shù)的66.7%

5、，抑制率超過90%的樣品共有26個(gè)。R-1和S-3的乙酸乙酯部位清除活性最高（100%），拜糖平相當(dāng)含量為1 mg/mL。內(nèi)生真菌L-1、L-5、L-10、S-8、R-12的3個(gè)部位均對(duì)α-糖苷酶抑制率均大于80%，表現(xiàn)出較好的抑制活性。（樣品濃度均為1 mg/mL）
　　對(duì)28株內(nèi)生真菌的胞外多糖和胞內(nèi)多糖進(jìn)行提取，得到56個(gè)粗多糖樣品，進(jìn)行多糖含量測定及抗氧化活性實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明：內(nèi)生真菌L-14（250 mL發(fā)酵量）的胞外粗多

6、糖中多糖含量最多，為0.89 g。有1個(gè)樣品VC當(dāng)量大于100μg/mg，7個(gè)多糖樣品DPPH自由基清除活性超過80%；11個(gè)多糖樣品對(duì)羥自由基清除率超過80%。（樣品濃度均為1 mg/mL）
　　將28株明月草內(nèi)生真菌回接入明月草植物培養(yǎng)瓶中，觀察內(nèi)生真菌對(duì)明月草生長狀況的影響。結(jié)果表明，內(nèi)生真菌回接42 d后，有11株內(nèi)生真菌可以和明月草共生，其中內(nèi)生真菌L-1和R-6能促進(jìn)植物的株高和葉片數(shù)的增加，11株內(nèi)生真菌對(duì)根部均有抑

7、制作用；5株內(nèi)生真菌造成明月草實(shí)驗(yàn)組全部死亡，分別是內(nèi)生真菌S-4、S-6、R-3、R-11和L-9。
　　將5株明月草內(nèi)生菌經(jīng)PD液體發(fā)酵，菌液濃縮后定量加入明月草生長培養(yǎng)瓶中，研究發(fā)酵液對(duì)明月草生長的影響。結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，各發(fā)酵液處理組對(duì)明月草水分含量、葉片數(shù)、株高增速、葉綠素含量、地上部分脯氨酸含量無顯著性影響。S-8處理組可顯著增加植物地上生物量，降低MDA的含量；L-6處理組顯著抑制植物根的長度生長，增加組培苗根

8、中的脯氨酸含量，極顯著降低了明月草MDA的含量；S-4處理組顯著增加植物SOD活力，降低植物地上部分可溶性糖的含量，極顯著降低了明月草MDA的含量；S-7處理組顯著降低植物地上部分可溶性糖的含量，極顯著降低了明月草MDA的含量；R-4處理組顯著增加植物根部可溶性糖的含量，極顯著降低了明月草MDA的含量。
　　研究表明明月草含有豐富的內(nèi)生真菌，其發(fā)酵產(chǎn)物具有一定的抗氧化、抑菌和抑制α-糖苷酶活性，具有廣闊的開發(fā)前景；其內(nèi)生真菌回接對(duì)