幾種植物內(nèi)生真菌的分離鑒定及其次級(jí)代謝產(chǎn)物生物活性的研究.pdf

1、植物內(nèi)生真菌（endophyte fungi）是指那些在其生活史的一定階段或全部階段生活于健康植物組織和器官內(nèi)部或細(xì)胞間隙的真菌，因其長(zhǎng)期生活在宿主體內(nèi)，植物內(nèi)生真菌可以產(chǎn)生與宿主植物相同或相似的代謝產(chǎn)物。菊芋（Helianthus tuberosus）屬菊科向日葵屬一年生草本植物，有文獻(xiàn)報(bào)道，菊芋葉片提取物有顯著的抑菌效果，說(shuō)明菊芋植株含有抑菌性成分。本論文首先從菊芋中分離得到23株內(nèi)生真菌；為了擴(kuò)大內(nèi)生真菌的來(lái)源，又選擇天麻（Gas

2、trodia elata）、白術(shù)（Atractylodes macrocephala）、防風(fēng)（Saposhnikovia Divaricata)三種藥用植物，從中分別分離獲得7株、9株、6株內(nèi)生真菌。對(duì)在生物活性測(cè)定中活性較好的J015、J018、F003、T003四株菌株進(jìn)行了分子生物學(xué)鑒定，它們分別屬于根霉屬、青霉屬、枝頂孢霉屬和鐮孢霉屬。
　　對(duì)所分離的45株內(nèi)生真菌的發(fā)酵液分別用正丁醇、乙酸乙酯萃取，對(duì)菌絲體用乙醇熱回流提

3、取，共得到3個(gè)部位、135個(gè)浸膏樣品。采用濾紙片法對(duì)135個(gè)樣品的抑菌活性進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，4種植物內(nèi)生真菌中具有抗菌活性的菌株所占比例都超過(guò)40％，菊芋內(nèi)生真菌具有抗菌活性的菌株比例最高，達(dá)57.1％。
　　采用鐵氰化鉀還原法測(cè)定了135個(gè)樣品的總還原力，結(jié)果顯示所有樣品都表現(xiàn)出了一定程度的還原能力，在同等濃度下的乙酸乙酯部位和正丁醇部位的還原力比菌體部位樣品要強(qiáng)，其中菊芋內(nèi)生真菌 J015菌株正丁醇部位的總還原力尤為突出，吸

4、光度值為2.555，略低于陽(yáng)性對(duì)照Vc的吸光度值2.636。清除·OH的活性測(cè)定結(jié)果顯示，135個(gè)樣品對(duì)·OH的清除作用存在較大差異，與對(duì)照樣品Vc的清除能力（89.73%）相比較，清除率大于70%的有24個(gè)樣品，占樣品總數(shù)的18.45%，其中J020乙酸乙酯部位的清除率較高，達(dá)到88.67%。
　　對(duì)活性最好的菊芋內(nèi)生真菌 J015進(jìn)行了培養(yǎng)基配方和生長(zhǎng)條件的優(yōu)化，初步確定了最佳培養(yǎng)基配方（玉米粉2%、硫酸銨3%、磷酸二氫鉀0.

5、2%、硫酸鎂0.05%、碳酸鈣0.2%、復(fù)合維生素B0.05%、維生素E0.1%）和最適生長(zhǎng)條件（溫度28℃，pH值6.0，轉(zhuǎn)速150r/min）。以最適培養(yǎng)條件培養(yǎng)J015菌株，對(duì)其進(jìn)行抑菌試驗(yàn)和抗氧化實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，J015菌株發(fā)酵液乙酸乙酯部位對(duì)大腸桿菌的抑菌活性明顯增強(qiáng)，乙酸乙酯部位總還原力和對(duì)?OH的清除率也明顯增強(qiáng)。
　　采用薄層層析、硅膠柱層析和制備薄層等分離方法，對(duì) J015菌株發(fā)酵液的正丁醇提取物進(jìn)行了分離，從中