地黃內(nèi)生真菌及其活性代謝產(chǎn)物的研究.pdf

1、微生物一直是人們獲得活性物質(zhì)的豐富資源，多種具有良好治療效果的抗生素都是從微生物中得到。在過去的70多年里，已從微生物中發(fā)現(xiàn)了30000～50000中天然產(chǎn)物，8000多種是抗菌抗腫瘤劑。內(nèi)生真菌逐漸成為研究的熱點，為新型抗生素的篩選提供了大量先導(dǎo)化合物。 植物內(nèi)生菌(endophyte)是指一類在其部分或全部生活史中存活于健康植物組織內(nèi)部，而不使宿主植物表現(xiàn)出明顯感染癥狀的微生物，在長期進(jìn)化過程中與寄主協(xié)同進(jìn)化，在演化過程中兩

2、者形成了互惠共生關(guān)系。 這些次生代謝產(chǎn)物多數(shù)具有一定的生物活性，有在醫(yī)藥領(lǐng)域應(yīng)用的潛力。 本課題組于2007年3月，從河南溫縣采集地黃植物根部材料樣本，24小時內(nèi)運至上海，隨即對其內(nèi)生真菌進(jìn)行分離。獲得623個菌株，初步形態(tài)觀察對照后去除重復(fù)菌株，得到菌株36個。所得菌株小樣培養(yǎng)后制備提取液，高效液相檢測菌絲及培養(yǎng)液提取物制作指紋圖譜。得到的指紋圖譜進(jìn)一步核實比對，最終確定無重復(fù)菌株數(shù)目為22株，實驗證明菌株分離過程中采

3、用多種分離培養(yǎng)基有助于分到更多不同種類的內(nèi)生真菌。所得的菌株統(tǒng)計結(jié)果顯示有四株真菌相對穩(wěn)定的存在于該植物組織中(分離頻率＞1％)，其余菌株分離頻率小于1％；此四株菌株分別被鑒定為Rhizoctonia sp.，Chaetomium sp.，Verticillium sp.，Mucor sp。分離統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示部分內(nèi)生真菌較穩(wěn)定的存在于該植物中，而另一些則僅僅偶然寄生于該植物。通過稻瘟霉模型篩選具有抗性代謝產(chǎn)物的真菌菌株，檢測結(jié)果顯示其中三

4、株菌(Chaetomium sp.，Verticillium sp.，Xylaria sp.)的提取物對稻瘟霉顯示明顯的抗性，抗真菌采用了白色念珠菌(Candida albicans)、新生隱球菌(Cryptococcusneoformans)、紅色毛癬菌(Trichophyton rubrum)、薰煙曲霉菌(Aspergillus fumigatus)四種菌株，活性較好有不同程度的抑制作用，其中兩種具有良好活性。 通過以上研究

5、，得出一些有意義的結(jié)果，主要包括：(1)從植物地黃中分離得22株無重復(fù)內(nèi)生真菌，表明地黃內(nèi)生真菌的生物多樣性同時說明某些菌株較穩(wěn)定的生活在此植物中；(2)在分離試驗中發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基對于內(nèi)生真菌的分離有一定影響，采用多種培養(yǎng)基能分離到更全面具有多種適應(yīng)性的菌株；(3)通過兩種相互拮抗試驗?zāi)Ｐ驼f明內(nèi)生真菌之間的生存競爭會顯著抑制彼此菌絲的生長；(4)通過柱層析對這3株內(nèi)生真菌的發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行分離純化，得到單體化合物12種，最終徹底闡明其中9種化合