水產品中四環(huán)素類藥物膠體金免疫層析試紙條的研制.pdf

1、四環(huán)素類藥物主要包括四環(huán)素、土霉素、金霉素等，由于較高濃度時其具有良好的殺菌作用，所以被廣泛的應用于各個領域，也就不可避免的出現(xiàn)了濫用現(xiàn)象，造成了嚴重的藥物殘留。而四環(huán)素類藥物可引起人類的過敏反應等一系列疾病，對人體和環(huán)境具有嚴重的危害?，F(xiàn)階段針對于四環(huán)素類藥物的檢測方法存在著操作繁瑣、檢測費用高等不適合推廣使用的缺點，建立快速靈敏的四環(huán)素類藥物檢測方法十分必要。
　　膠體金免疫層析試紙條法自發(fā)現(xiàn)至今已在多個領域被普遍使用，主要就

2、是其快速高效、安全簡便。本文對試紙條制備過程中的條件進行探索和優(yōu)化，從而制得靈敏度高的四環(huán)素類藥物膠體金免疫層析試紙條。
　　本文膠體金的制備主要是利用檸檬酸三鈉還原法，并通過研究對制備過程中影響因素進行優(yōu)化，最終在先加入100 mL0.01％的氯金酸溶液，后加入0.5 mL4％檸檬酸三鈉溶液，在轉速是200 r/min，溶液變紅后控制溫度檔是400℃（沸騰時實際溫度為100℃），加熱時間是10 min條件下制得了本試驗所需粒徑為

3、20 nm左右膠體金溶液。
　　將制得的膠體金放置至室溫后用0.22μm濾膜進行過濾，并取過濾后的膠體金利用紫外可見分光光度計對其進行光譜掃描，從而可以初步判定膠體金的質量。經過初步判定合格的膠體金，可以用來進行下一步膠體金標記抗體試驗。通過對影響膠體金標記的溶液pH、標記時間、加入抗體的稀釋倍數(shù)、抗體的具體加入量等進行了系列的研究，在1 mL膠體金溶液中加入5μL0.2 mol/L的K2CO3使溶液的pH大約為8.0，標記時間為

4、30 min，抗體稀釋倍數(shù)是6倍、抗體加入量是9.6μg條件下制得了所需金標抗體，并對所制得金標抗體質量進行了初步判定。
　　通過對NC膜的選擇，包被液巾離子強度、包被濃度、金標墊前處理等因素的研究，在使用Millipore135型號的NC膜，包被液中NaCl的濃度為8.5 g/L，檢測線上使用濃度為1.0 mg/mL的四環(huán)素類抗原進行包被，質控線上使用濃度是0.75 mg/mL羊抗鼠二抗進行包被的條件下制得了本試驗所需試紙條。并